黑曲霉葡萄糖氧化酶产生菌的筛选及其基因在大肠杆菌中的克隆表达

【作者】 顾磊； 张娟； 堵国成； 陈坚；

【机构】 江南大学生物系统与生物加工工程研究室；

【摘要】 葡萄糖氧化酶是应用于食品工业、生物传感器、医学检验等领域的重要分析用酶与工业用酶。针对目前国内使用的葡萄糖氧化酶仍主要依赖于进口的现状,本研究完成了黑曲霉Aspergillus niger葡萄糖氧化酶的产生菌筛选鉴定及培养基优化,实现了其在大肠杆菌中的表达,为实现该酶的工业化生产奠定了研究基础。主要研究结果如下:1.通过快速定性定量筛选方法从土壤中筛选得到78株菌株,其中8株菌具有定量可检测葡萄糖氧化酶酶活。鉴定酶活最高菌株G2为黑曲霉（Aspergillus niger CCTCC M2011291）。2.对黑曲霉Aspergillus niger CCTCC M2011291产葡萄糖氧化酶发酵培养基优化。经过培养基配方的优化试验,产酶率有了较大的提高,发酵液酶活提高了15倍到达2.2 U ml^-1。3.以黑曲霉Aspergillus niger CCTCC M2011291总DNA为模板,设计引物PCR得到葡萄糖氧化酶蛋白的基因,并和具有PelB信号肽的pET20b（+）质粒相连,使葡萄糖氧化酶基因在E.coli BL21（DE3）中过量表达。通过IPTG诱导,重组菌葡萄糖氧化酶酶活为5.5 U ml^-1。更多还原