碱性脂肪酶在液态条件下的热稳定性研究

【作者】 吴松刚； 施巧琴； 龚福生； 周晓兰； 余雪冰； 黄鹭强；

【机构】 福建师范大学生物工程学院；

【摘要】 碱性脂肪酶作为新型酶制剂具有广泛的用途,但由于其在液态条件下稳定性差,其应用范围受到很大的限制。为了进一步扩大其应用范围,进行提高在液态条件下热稳定性的研究是十分必要的。1.不同单糖对酶热稳定性的影响在供试的五种单糖中,均能提高该酶的稳定性,其中以葡萄糖的效果最好,其浓度为20-30%左右。2.不同双糖对酶热稳定性的影响在供试的四种双糖中,均能提高该酶的稳定性,其中乳糖效果最好,蔗糖次之。从成本考虑,可选择蔗糖,其浓度约为30%。3.不同羧酸盐对热稳定性的影响供试的五种羧酸盐均可提高该酶热稳定性,其中以丁二酸钠效果最好,其浓度为0.6mol/l。4.不同多元醇对酶热稳定性的影响供试的六种多元醇均可提高该酶热稳定性,其中肌醇和山梨醇浓度以20%最为显著。5.复合稳定剂的筛选及其对酶活稳定性的影响设计4水平3因子的稳定剂组合的正交试验,筛选出的甘油30%,蔗糖20%,山梨醇12%,丁二酸钠0.1mol/l的F组合,对该酶进行热稳定性试验,热稳定性由41℃提高到55℃。在25℃保存条件下,30天后,仍有80%以上的残余酶活,而对照组保存15天,酶活完全丧失。6.温度对酶构象的影响经DEAE-纤维素柱和Sephdex-G200柱纯化后的FS-1884脂肪酶,分别在40℃和45℃处理10min。立即冷却,测定剩余酶活。40℃加热已使酶分子构象发生了轻度的变化,然而这种变化还不足以减低酶活性。45℃加热10min,已使酶分子发生了更大的变化,从而使酶活力大量丧失。7.稳定剂对酶构象的保护作用含10%甘油和5%橄榄油底物的酶液,经45℃加热10min后,与对照组酶相比,其荧光强度大大下降,酶活力下降76%。综上所述,适量的添加剂在一定程度上能够保护酶的构象,从而达到稳定酶活力的作用,实验还证实甘油是通过添加对酶分子的整体构象起到稳定作用,底物主要影响酶活性中心的基团,而对整个分子的构象影响小。更多还原