碱性脂肪酶高产变株的选育技术路线

【作者】 施巧琴； 章文贤； 韦裕萍； 蒋咏梅； 余雪冰； 黄文树； 吴松刚；

【机构】 福建师范大学生物工程学院；

【摘要】 以扩展青霉Penicillium expansuim S14原生质体为出发菌株,采用抗阻遏和解除反馈抑制筛选模型,获得了发酵酶活比出发菌株提高4.75倍的FS1884变株,并已在生产中推广应用,本文报告该高产变株的选育技术路线。1.出发菌株S14原生质体的制备和再生通过对溶壁酶酶种、酶作用条件、原生质体稳定剂及再生培养基的研究,以0.6%纤维素酶+o.6%蜗牛酶、DTT预处理,稳定剂为0.6NaCl+0.3%CaCl、酶解3小时,可形成原生质体2.56×107/ml。再生率可达81.32%。2.抗阻遏和解除反馈抑制筛选模型以琥珀酸钠筛选抗阻遏突变株和以制霉菌素筛选高渗透性变株作为筛选模型。其中制霉菌素为20μg/ml、琥珀酸钠为1000μg/ml。采用He-Ne激光、CO⁶⁰、NTG等诱变剂进行定向诱变,经过六代连续定向诱变,获得高产变株FS1884。3变株高效表达系统通过优化发酵工艺条件,包括:种子强化工艺,碳源和氮源优化,量适C/N的正交试验,使变株产酶的高产特性得以充分表达,发酵酶活稳定在7500u/ml以上,达到稳产高产的选育目标。更多还原