延长根瘤菌剂保存时间的方法研究

【作者】 赵家星； 郑会明； 钟增涛；

【机构】 南京农业大学生命科学学院；

【摘要】 通过对中慢生紫云英根瘤菌Mh.93的生长曲线及其各个时间点保存效果的研究,找到最适的保存时间点是以千分之一接种活化至60小时。以培养60小时Mh.93菌液离心后加入dH₂O,TY培养基,TY通氧,YMA培养基,生理盐水,海藻糖（保护剂）,苯甲酸钠（抑制剂）,菌液浓缩及不同的pH条件下为进行保存实验,发现pH中性、不通氧条件可以增加保存期,加入保护剂可以延长保存期,加入抑制剂,前期菌体死亡很快,但后期保持稳定,进行结瘤试验验证菌剂保存后的效果,证明添加各种成分后,不会影响菌体正常结瘤。选取海藻糖,蔗糖,葡萄糖,麦芽糖,乳糖,甘露醇,山梨醇,甘油,谷氨酸钠,二甲亚砜,乙二醇,苯甲酸钠,抗坏血酸（VC）等为保存条件,研究各单因子对于保存效果的影响。发现其最适浓度为海藻糖1%、2%,蔗糖1%,葡萄糖1%、2.5%,麦芽糖1%,乳糖1%,甘露醇1%,山梨醇1%、2.5%,甘油大于1%,谷氨酸钠2.5%,二甲亚砜0.5%,1%,2.5%,乙二醇1%,苯甲酸钠10mg/kg,抗坏血酸（VC）不适用。考虑到成本等因素,选取单因子实验中保存效果较好的几种单因子进行正交实验,得出配方52保存效果最好,并通过结瘤试验,证明配方52不会影响菌体正常结瘤。将配方52应用于大豆根瘤菌Arg,USDA110,113-2,蚕豆根瘤菌,豌豆根瘤菌,四季豆根瘤菌,苜蓿根瘤菌,花生根瘤菌,三叶草根瘤菌,发现配方52对于各种根瘤菌的保存期都有延长,但延长效果不同,证明配方52具有广谱适应性,但在实践中,需针对不同生产菌株做出适当调整。更多还原