基于纳米粒子的时间分辨荧光免疫法检测日本鳗鲡的嗜水气单胞菌

【作者】 辛甜甜； 王艺磊； 冯建军； 郭松林； 林鹏i；

【机构】 集美大学水产学院农业部东海海水健康养殖重点实验室；

【摘要】 时间分辨免疫荧光分析法(TRFIA)是一种用镧系元素粒子螯合物作为示踪物的分析方法,该螯合物荧光寿命长,通过时间分辨方式可与本底荧光相区分,可有效消除背景荧光的干扰。纳米技术是指在纳米尺度范围内按照自己的意志直接操纵原子核分子或原子团和分子团,进行材料加工以及创制具有特定功能的产品。本实验将TRFIA与纳米颗粒相结合,首次用于水产颗粒性抗原的检测。本实验将嗜水气单胞菌B15固定于微孔板作为检测抗原,从日本鳗鲡分离出嗜水气单胞菌B15,并注射新西兰兔制得Ig G,将其与聚苯乙烯荧光微球标记作为检测抗体,建立了嗜水气单胞菌的直接TRFIA,并通过单因素分析与正交试验相结合的方式,研究了细菌包被时间及温度和纳米标记抗体浓度对检测的影响,得出细菌包被时间对结果影响显著,且包被时间为12h、包被温度为40℃、标记抗体稀释度为1:3000是检测的最佳条件。本方法检出限为1.0×105CFU/ml,相关系数达0.99以上。交叉实验结果表明其具有较高的特异性,板内和板间变异系数分别为4.06%和8.41%。证明了基于纳米粒子时间分辨免疫荧光法在颗粒性抗原检测中的可行性。更多还原