大片形吸虫病免疫胶体金诊断试纸条的研制

【作者】 王华俊； 陈汉忠； 谢彩华；

【机构】 河南省动物疫病预防控制中心； 广西大学；

【摘要】 大片形吸虫(Fasciola gigantica)病是由大片形吸虫感染引起的寄生虫病,呈全球性分布。动物感染大片形吸虫后引起急性、慢性疾病,或呈隐性经过,给全球经济动物的生产造成巨大经济损失;同时,大片形吸虫病也是一种食源性人畜共患寄生虫病,严重威胁人类健康,人大片形吸虫病将作为公共卫生问题重新引起人们的重视。该病的防治、净化依赖有效、快捷、易于判定的检测方法,为此本研究将采用免疫学技术和胶体金层析技术建立一种新的大片形吸虫病诊断和检测方法。利用本实验室保存的杂交瘤细胞株7D1和7D4分别制备和纯化得到抗大片形吸虫分泌排泄抗原单克隆抗体,同时制备和纯化大片形吸虫分泌抗原;利用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,再用胶体金标记纯化的抗大片形吸虫ES抗原单克隆抗体7D1,在硝酸纤维素膜的质控带(C线)和检测带(T线)处分别包被羊抗鼠Ig G二抗和抗大片形吸虫ES抗原单克隆抗体7D4,经反应条件优化,组装成了大片形吸虫免疫诊断试纸条。经测试该诊断试纸条对ES抗原的检测下限为0.94μg/m L,与胰扩盘吸虫、前后盘吸虫、支原体、弓形虫、伊氏锥虫VSG抗原均无交叉反应,特异性较好。分别用诊断试纸条和双抗体夹心ELISA方法检测19份阳性粪样上清和35份阴性粪样上清,试纸条的总符合率为87.04%,ELISA为94.44%.利用研制的试纸条,对采集于广西地区水牛的334份新鲜样本进行了调查检测,阳性率为38.62%。结果证明该试纸条方法操作简单、快速、易于判定,特异性好,敏感性高,适合基层大面积普查和现场检测诊断大片形吸虫病,本检测方法的建立为大片形吸虫病的诊断和流行病学调查提供了新的方法。更多还原