人羊水干细胞作为汗腺重建种子细胞的研究

【作者】 梁含思； 孙青； 李芳； 甄允方； 许云云； 秦明德； 张学光；

【机构】 苏州大学附属第一医院临床免疫研究所； 江苏省干细胞与生物医用材料重点实验室； 苏州大学基础医学与生物科学学院人体解剖与组织胚胎学教研室； 苏州大学附属儿童医院小儿骨科诊断与治疗中心； 苏州大学附属儿童医院儿科研究所；

【摘要】 目的 :利用条件培养基诱导的方法将人羊水干细胞诱导为汗腺样细胞,研究人羊水干细胞重建汗腺的可能性,使汗腺的功能性重建和功能性皮肤修复成为可能,具有创新性和潜在的应用价值。方法 :取稳定培养的人羊水干细胞,以5×104个/孔的密度接种于6孔板中,待细胞贴壁后,添加汗腺细胞诱导培养基(SGDM,汗腺细胞培养基:CM=1:1,额外添加50ng/ml EGF。CM为培养过人汗腺细胞的KGM2培养基,用0.22μm的滤器过滤,收集到的培养基),诱导分化21天后得到汗腺样细胞;光学显微镜观察其细胞形态;Realtime-PCR分析其基因表达情况;流式细胞仪检测汗腺相关蛋白表达;免疫荧光染色检测汗腺相关蛋白表达;电镜技术观察细胞内部结构;3D组织培养方法检测分化后的汗腺样细胞形成汗腺样结构的能力,并对形成的汗腺样结构进行免疫荧光染色检测;汗腺样细胞与T细胞共培养,CCK8检测其对活化T细胞增殖的抑制作用。结果 :人羊水干细胞分化后得到的汗腺样细胞与体外培养的人汗腺细胞形态相似;诱导分化比例约为30%;Realtime-PCR和免疫荧光结果显示,诱导后的汗腺样细胞表达汗腺细胞相关指标EDA、EDAR、K8和CEA;透射电镜结果显示诱导后的细胞可以观察到与汗腺细胞相似的结构-微绒毛;3D组织培养结果显示诱导后的K8+细胞可以在胶中形成汗腺样结构,使汗腺样细胞分化更加完善;T细胞增殖实验结果显示汗腺样细胞具有抑制T细胞增殖的能力。结论 :人羊水干细胞是介于成体干细胞和胚胎干细胞之间的一类干细胞,它具有较高的增殖能力和分化能力,以及低免疫源性,使其作为汗腺重建的种子细胞具有独特的优势。利用条件培养基可以将人羊水干细胞诱导成为汗腺样细胞,并能在胶中形成汗腺样结构。汗腺样细胞与人羊水干细胞相似具有低免疫源性,为汗腺的功能性重建提供了良好的种子细胞。更多还原