T-exo负载DC诱导抗肝癌细胞免疫效应研究

【作者】 李洁羽； 陈明水； 陈淑萍； 周智锋； 王玲； 叶韵斌；

【机构】 福建省肿瘤医院肿瘤免疫学研究室福建省肿瘤转化医学重点实验室；

【摘要】 目的:观察肝癌细胞来源的外泌体(T-exo)负载DC体外刺激细胞毒T细胞(CTL)对肝癌细胞的杀伤作用。方法 :采用超滤离心技术联合蔗糖密度梯度超速离心的方法从肝癌Huh-7细胞培养上清液中分离外泌体(T-exo),透射电镜鉴定形态,Western blot检测外泌体相关蛋白CD9、CD63、HSP70及肿瘤抗原分子AFP的表达;分离健康供者外周血单个核细胞(PBMC)培养DC,流式细胞术鉴定负载T-exo的DC细胞表型;用2-(4-碘苯)-3-(4硝基苯)-5-(2,4-磺苯基四氮唑)-2H-四唑单钠盐-1(WST-1)法检测负载T-exo的DC刺激T淋巴细胞增殖情况;流式细胞术Annexin-V/PI双染法检测负载T-exo的DC诱导CTL分别对AFP阳性Huh-7细胞及AFP阴性的SMMC7721的杀伤作用。结果 :透射电镜下见T-exo为圆形或椭圆形双层膜囊泡状小体,大小不等,平均直径50-100nm;表达外泌体膜相关分子及肿瘤抗原分子。负载T-exo的DC刺激T细胞增殖能力及诱导效应细胞对靶细胞的细胞毒活性明显强于未负载T-exo的对照组DC。(P<0.05)结论 :负载T-exo的DC能促进T细胞增殖,提高CTL细胞的细胞毒活性诱导显著的抗肝癌效应。更多还原