结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白Rv2629的HLA-A2限制性CTL表位预测与初步鉴定

【作者】 王东方； 白雪娟； 梁艳； 林明贵； 吴雪琼；

【机构】 解放军309医院； 河北北方学院；

【摘要】 目的:对结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白Rv2629的HLA-A2限制性CTL表位进行预测、修饰及初步鉴定,为结核病新疫苗的研发奠定基础。方法 :综合应用SYFPEITHI超基序法、BIMAS量化基序法及Net CTL法三种生物信息学软件预测Rv2629蛋白序列中可能的HLA-A2限制性CTL表位;筛选分值均较高的多肽及其改造后的类似物作为候选表位进行合成;应用T2细胞系进行HLA-A2分子结合试验,检测候选表位肽结合的亲和力;以HLA-A2分子与表位肽结合物的解离试验检测其结合稳定性。结果 :综合分析三种生物信息学软件的预测结果,筛选出9条分值均较高的多肽,并对其中1条多肽进行改造,获得3个多肽类似物,一起合成作为候选表位肽。通过HLA-A2结合试验获得2条天然多肽(p315和p274)及3条改造多肽(p190-2L、p190-1Y、p190-1Y2L)与HLA-A2分子之间均有较高的亲和性(FI>1.5)。通过HLA-A2解离试验获得2条天然候选多肽(p315和p274)及2条候选改造多肽(p190-2L、p190-1Y2L)与HLA-A2分子的结合具有较高的稳定性(DC50>6小时)。结论 :结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白Rv2629的HLA-A2限制性CTL优势抗原表位肽p315、p274、p190-2L和p190-1Y2L具有较高的亲和力和较好的稳定性,可能成为结核分枝杆菌潜伏感染疫苗研发的候选靶位。经过对天然表位肽特定位点的氨基酸残基进行改造可以提高表位肽与MHC分子结合的亲和力和稳定性,但其免疫原性仍需通过体内、体外实验进一步的验证。更多还原