金葡菌非蛋白成份PGN模拟肽的保护性作用机制初步探究

【作者】 王湘豫； 陈益国； 黄钊霞； 侯晓睿； 卢晓； 朱平； 富宁； 刘北一；

【机构】 南方医科大学基础医学院免疫学教研室； 江西省人民医院检验科；

【摘要】 研究背景:近年因抗生素滥用,金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)耐药严重,免疫学防治被寄予希望。肽聚糖(peptidoglycan,PGN)是S.aureus细胞壁保守成份,但PGN属于TI抗原、免疫原性弱而不易用于疫苗候选。前期工作利用肽库筛选技术获得模拟PGN表位序列SPHxxSRLRSES,以此序列合成四分支多价抗原肽MAP27。目的:探讨MAP27作为免疫原,诱导急慢性感染小鼠的保护作用及机制。方法:体外鉴定MAP27抗原性。MAP27免疫小鼠,观察免疫鼠体内抗体生成、细胞免疫应答规律及特点;以及在脓毒症休克和脏器脓肿模型中保护性作用。结果:与对照肽相比,线性肽SP27及四分支多价抗原肽MAP27与抗PGN单抗和抗s aureus多抗特异性结合。MAP27能模拟PGN刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌IL-6和IL-12(P<0 01)。以MAP27免疫BALB/C鼠5次,末次免疫后2周以灭活金葡菌经尾静脉加强免疫一次。抗MAP27抗血清效价在第4次免疫后即可达到104;与对照肽免疫组相比,加强免疫诱导MAP27免疫组小鼠体内产生抗PGN及金葡菌超声裂解产物的IgG类抗体(P<0.001)。脓毒症休克模型中,空白组和对照肽组小鼠分别在感染后2天、5天内全部死亡,而MAP27免疫组在感染后7天仍有50%存活(P<0.001)。脏器脓肿模型中,S.aureus感染4天后,MAP27免疫组小鼠肾脏、肺脏中细菌残存量显著低于对照肽组(P<0.05)。与对照肽组和空白组相比,MAP27显著刺激MAP27免疫鼠脾细胞分泌IL-2(ELISA,P<0.01)、IFNγ(ELISA,P<0.001),而IL-4分泌量各组间无差别;灭活菌刺激MAP27免疫组分泌IFNγ和IL-17A的斑点形成细胞(spot-forming cells,SFCs)数量显著高于对照肽组(ELISPOT,P<0.05)。结论:四分支多价抗原肽MAP27模拟S.aureus非蛋白成份PGN,将其TI抗原转换为TD抗原;以此合成肽免疫小鼠可诱导CD4+T细胞介导免疫应答,并产生针对金葡菌感染的保护效应。更多还原