重组痘苗病毒rVTT-JEVE理化特性研究

【作者】 肖朋朋； 刘昊； 阎富龙； 陈智飞； 朱羿龙； 辛舒； 王茂鹏； 靖杰； 鲁会军； 金宁一；

【机构】 吉林大学动物医学学院； 中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所； 中国农业科学院特产研究所； 吉林农业大学动物科技学院； 长春中医药大学；

【摘要】 研究背景:痘苗病毒(Vaccina virus,VACV)属痘病毒科(Poxviridae)正痘病毒属(Orthopoxvirus),为双链DNA病毒,其核心结构外包裹有脂质囊膜,膜上分布有管状和球状的包膜蛋白,其核心结构呈双面凹形,包裹有长约200 kb的基因组DNA。病毒基因组有16个HindⅢ片段,由大到小依次为A~P,分布着约200个开放阅读框架(open reading frame,ORF),其中约有90个高度保守的基因,是痘苗病毒复制和形态发生的必需基因,如DNA和RNA聚合酶及各种转录因子基因等,主要分布于基因组的中间区段;其余的基因相对多变,为病毒复制非必需基因,如免疫调制因子基因、宿主范围相关基因和毒力相关因子基因等,赋予不同的病毒以各自独特的生物学特性。痘苗病毒基因组较大,可插入大量外源基因,而且非必须基因多删除后不影响病毒的复制和功能。目的:痘苗病毒作为疫苗载体具有接种途径简单、高滴度、低成本等优点,重组痘苗病毒投入使用之前进行理化特性试验,对重组痘苗病毒的生产、运输和保存有一定重要意义。方法:将重组痘苗病毒rVTT-JEVE作热、酸、碱、乙醚、氯仿、胰蛋白酶、超声波以及紫外线处理,然后接种到BHK-21细胞上,观察rVTT-JEVE毒价的变化,分析理化因素对rVTT-JEVE的影响。结果:在pH3~9范围内,酸碱度变化不会引起rVTT-JEVE毒价的显著变化。rVTT-JEVE经50℃处理60min、30 min和60℃处理15 min可被灭活;对5%的氯仿敏感;经终浓度0.5%的胰蛋白酶37℃作用1 h,病毒毒价降低2个滴度;对25%的乙醚不敏感;经40kHz超声波处理60min和80kHz处理30min即可灭活;30W紫外灯垂直距离10 cm照射15min、30 cm照射30min即可灭活。结论:rVTT-JEVE耐热、酸、碱、乙醚、氯仿及胰蛋白酶,对超声波、紫外线较敏感。更多还原