斑蝥酸钠维生素B6对肝癌细胞侵袭力的影响及可能的机制

【作者】 吴晓慧； 王顺祥； 杨宝明； 施喆； 李建坤；

【机构】 河北医科大学第四医院肝胆外科；

【摘要】 目的:研究斑蝥酸钠维生素B6对人肝癌细胞SMMC-772 1侵袭力的影响,并探讨其作用机制是否与Ras/Raf/MEK/ERK通路有关。方法:体外培养人肝癌细胞株(SMMC-7721);用不同浓度的斑蝥酸钠维生素B6(0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0μmol/L)作用于SMMC-7721细胞24h、48h和72h后,MTT法检测细胞的增殖;用不同浓度的斑蝥酸钠维生素B6(0.5、1.0、1.5、2.0μmol/L)作用于SMMC-7721细胞24h、48h和72h后,通过Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力的变化;Western-Blot方法测定不同浓度的斑蝥酸钠维生素B6(0.5、1.0、1.5、2.0μmol/L)分别作用于SMMC-7721细胞24h、48h后,细胞中ERK1/2和P-ERK1/2蛋白表达的变化。结果:MTT结果显示,斑蝥酸钠维生素B6作用于人肝癌SMMC-7721细胞24h时,各实验组与对照组均存在统计学差异(P<0.05),其增殖抑制率按药物浓度由低至高分别为4.93%、5.86%、13.9%、14.38%、20.14%、31.16%;药物作用为48h时,各实验组除0.25μmol/L与对照组之间外均存在统计学差异(P<0.05),其增殖抑制率分别为1.58%、14.8%、23.88%、25.93%、35.15%、49.05%;药物作用为72h时,各实验组与对照组均存在统计学差异(P<0.05),其增殖抑制率分别为12.5%、14.58%、14.6%、16.92%、18.42%、27.11%。Transwell侵袭实验结果显示,斑蝥酸钠维生素B6作用于SMMC-7721细胞24h时,实验组与对照组侵袭细胞数比较均存在统计学差异(P<0.05),各实验组侵袭抑制率按斑蝥酸钠维生素B6浓度从低到高分别为21.73%、31.14%、34.61%、46.44%;药物作用为48h时,各实验组与对照组侵袭细胞数比较均存在统计学差异(P<0.05),侵袭抑制率分别为26.68%、36.19%、42.24%、53.13%;药物作用为72h,其侵袭抑制率分别为14.56%、18.34%、31.48%、40.01%,其中0.5μmol/L、1.0μmol/L实验组与对照组侵袭细胞数比较无明显差异,而1.5μmol/L、2.0μmol/L实验组与对照组侵袭细胞数存在显著差异(P<0.05)。Westernblot方法检测ERK1/2、P-ERK1/2蛋白的表达,结果显示:ERK1/2蛋白光密度值比(目标条带/β-actin)在实验组与对照组中均未表现出明显差异。P-ERK1/2蛋白的光密度值比(目标条带/β-actin)在24h各实验组按斑蝥酸钠维生素B6浓度从低到高分别为0.925±0.038、0.941±0.02、0.7±0.017、0.565±0.031,对照组为1.185±0.146,各实验组与对照组比较差异存在统计学意义(P<0.05);48h各实验组p-ERK光密度值比分别为1.558±0.1 55、1.555±0.094、1.397±0.014、0.796±0.019,对照组为2.109±0.1,各实验组与对照组比较差异存在统计学意义(P<0.05)。结论:斑蝥酸钠维生素B6能够抑制人肝癌细胞SMMC-772 1的增殖及侵袭力,均呈浓度依赖性(P<0.05)。斑蝥酸钠维生素B6可显著抑制人肝癌SMMC-7721细胞p-ERK1/2蛋白的表达,且下调的程度与药物剂量相关(P<0.05)。提示斑蝥酸钠维生素B6可抑制ERK1/2蛋白磷酸化,从而对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖和侵袭转移发挥抑制作用。更多还原