抗-OX40/抗-AFP-纳米微粒在CTL抗肝癌中作用的实验研究

【作者】 欧阳海超； 陈明水； 李洁羽； 叶韵斌；

【机构】 福建省肿瘤医院肿瘤免疫学研究室 福建省肿瘤转化医学重点实验室；

【摘要】 背景:AFP是原发性肝癌的主要抗原之一,并成为肝癌免疫治疗的重要靶点。细胞毒性T淋巴细胞(CTL)是目前抗肿瘤免疫治疗的主要效应细胞,而定向趋化CTL细胞到达肿瘤组织局部有效抑制肿瘤的生长是细胞免疫治疗取得成功的关键。目的:制备抗-OX40及抗-AFP抗体偶联的纳米微粒,并探索其对CTL生物学效应的影响。方法:1.用PLGA、乙睛和F-127制备PLGA纳米微粒,并用NHS和EDC活性偶联剂在纳米微粒表面包被上抗-OX40抗体和抗-AFP抗体。2.外周血分离出单个核细胞,再用VarioMACS系统分选纯化CD14+、CD8+细胞,用"IL-4+GM-CSF"定向扩增分化CD14~+为DC细胞,成熟的DC细胞和CD8+细胞按照比例混合培养活化的CTL细胞。3.应用WST-1方法检测包被抗-OX40/抗-AFP-纳米微粒对CTL增殖影响。Elisa方法检测细胞增殖分泌的上清中IL-2和IFN-γ含量。4.LDH方法检测抗-OX40/抗-AFP-纳米微粒对CTL杀伤HepG2肝癌细胞的作用。结果:1.成功制备出大小粒径较均匀的PLGA纳米微粒,形貌为大小较均匀的圆形颗粒,粒径大小约(275nm±35nm),Zetasizer检测空白PLGA纳米微粒Zeta电位为-(25.12±5.34)mV。2.偶联抗-OX40抗体/抗-AFP抗体的PLGA纳米粒子能有效诱导CTL细胞的活化与增殖。3.LDH实验结果显示:加入抗-OX40/抗AFP-纳米微粒能显著提高CTL细胞对AFP阳性HepG2细胞的杀伤的作用(P<0.05);在荧光显微镜下分别观察细胞膜染色的CTL和HepG2,加入抗-OX40/抗-AFP-纳米微粒后,CTL细胞与HepG2细胞结合比例增加,并结合紧密。结论:抗-OX40/抗-AFP-纳米微粒能有效刺激CTL细胞的增殖活化,同时抗-OX40/抗-AFP-纳米微粒能使靶细胞HepG2和效应细胞CTL两者之间更加紧密结合,增强CTL细胞对HepG2细胞的杀伤作用。更多还原