食管鳞状细胞癌多药耐药机制研究

【作者】 刘亮； 左连富； 王静；

【机构】 河北医科大学第四医院,肿瘤研究所,流式细胞室；

【摘要】 目的:研究三磷酸腺苷结合转运蛋白G2(ATP-binding cassette transporter G2,ABCG2)在食管鳞状细胞癌中的表达及其意义,通过建立食管鳞癌多药耐药细胞,研究ABCG2与食管鳞癌多药耐药的关系,探讨食管鳞癌多药耐药机制。方法:利用流式细胞术、免疫组织化学及Western-blot方法检测食管鳞状细胞癌、不典型增生及正常组织中ABCG2表达水平。扩增ABCG2基因,与pcDNA3.1载体连接,构建pcDNA3.1-ABCG2重组质粒,转染Eca109细胞后用G418筛选稳定转染细胞,采用流式细胞术等多种方法检测细胞中ABCG2表达水平,MTT、流式细胞术等方法评价转染细胞的多药耐药特性。利用抗癌药物阿霉素(ADM)药物浓度递增细胞培养的方法诱导食管鳞状细胞癌Eca109细胞产生耐药,采用流式细胞术等多种方法检测细胞中ABCG2表达水平,MTT、流式细胞术等方法评价细胞的多药耐药特性。结果:流式细胞术检测结果显示,食管鳞状细胞癌中ABCG2蛋白表达水平显著高于食管不典型增生及正常组织(P<0.05),免疫组织化学及Western-blot检测结果同流式细胞术检测结果一致。成功建立转染ABCG2基因的Eca109/ABCG2细胞,Eca109/ABCG2细胞中ABCG2表达水平显著增高,且Eca109/ABCG2细胞具有多药耐药细胞特性,对多种抗癌药物具有耐药性。ADM药物浓度递增细胞培养方法成功建立食管鳞癌多药耐药细胞Eca109/ADM细胞,与Eca109细胞相比,ABCG2表达水平显著增高。结论:ABCG2在食管鳞癌组织中的高表达可能参与了食管癌耐药的形成,Eca109/ABCG2及Eca109/ADM细胞具有ABCG2的耐药表型,可作为食管鳞癌多药耐药研究的细胞模型,ABCG2参与了食管鳞癌多药耐药的形成,可作为食管鳞癌多药耐药逆转的新靶点。更多还原