CD59基因突变与肿瘤免疫逃逸信号转导的相关性研究

【作者】 高美华； 王冰； 王丽娜； 丛蓓蓓； 任书荣；

【机构】 青岛大学医学院免疫室；

【摘要】 立项背景:目前恶性肿瘤已成为人类致死的首位病因,其发病机理尚未阐明,临床缺乏有效地诊疗手段。近年来新型免疫分子及诊疗技术不断问世,为解释肿瘤发病机理、诊断与治疗展示了广阔的前景。据国外报道在肿瘤细胞如肠癌、胃癌等发现CD59过表达,提示CD59可能与肿瘤的失控性生长和恶性转化有关。但与肿瘤逃逸相关的CD59活性位点,国内外尚未见报道。目的:本研究采用噬箘体肽库展示及生物信息学技术,旨在经体内外实验从基因及分子水平证实CD59与肿瘤逃逸信号转导的相关性;经基因突变、RNAi及短肽封条等多靶点干预CD59观测其对生殖系统肿瘤的抑瘤效应。为CD59作为肿瘤诊疗新靶标提供实验依据。方法:采用基因点突变技术构建两种CD59突变基因并重组人真核表达质粒,通过转基因技术建立高效真核表达系统,观测细胞表面野生型CD59与突变型CD59分子的表达情况,探讨CD59抗补体活性变化。证实W40位点及邻近氨基酸的生物学活性。利用RNA干扰(RNAi)技术探讨对宫颈癌HeLa细胞CD59基因表达的沉默作用以及对裸鼠卵巢癌移植瘤的抑瘤效应。采用基因活性位点敲除及RNAi多方位对肿瘤逃逸相关CD59分子进行干预,分析其蛋白质的同源序列,寻找与人CD59分子特异结合的配体蛋白质,设计并研制具有拮抗肿瘤逃逸相关人CD59活性位点的短肽封条;观察其对肿瘤封闭拮抗效应。从基因及分子水平证实CD59分子在肿瘤免疫逃逸信号转导通路中的作用。结果:1.利用噬菌体肽库技术及基因敲除证实CD59W40为肿瘤逃逸相关的活性位点。2.首次研制成功CD59特异短肽封条(SP22),证实其对HeLa细胞、前列腺癌细胞(PC-3)及卵巢癌细胞具有良好的抗肿瘤效应。3.采用RNAi干扰技术:成功构建了CD59siRNA重组载体。证明该重组载体能有效沉默CD59基因、抑制肿瘤细胞CD59mRNA的表达、折叠及胞膜的转运作用。结论:1.成功构建两种突变CD59基因重组载体真核表达系统。2.证实CD59W40位点与肿瘤逃逸密切相关。3.siRNA介导的RNAi能有效抑制CD59基因的表达,并能增加补体介导的溶细胞活性及诱导细胞凋亡。4.CD59特异配体肽具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用。由此证明CD59多靶点干预具有良好抗肿瘤效应。更多还原