人IL-29的定点突变及抗肿瘤活性初步分析

【作者】 陈伟； 朱荣； 葛春蕾； 陆源； 李利云； 李菲； 邬敏辰；

【机构】 江南大学无锡医学院； 江南大学生物工程学院； 江南大学药学院；

【摘要】 目的:在基因水平对人白细胞介素-29（hIL-29）成熟肽进行分子改造,以获得生物学活性更高的IL-29变异体。方法:根据hIL-29成熟肽的生物信息学分析数据,采用大引物PCR方法对其肽链第33位赖氨酸、35位精氨酸的编码基因进行定点突变,获得的hIL-29变异体基因构建重组真核表达质粒转化毕赤酵母（Pichiapastoris）GS 11 5进行发酵表达,经纯化得到重组人白细胞介素-29变异体蛋白(rhIL-29^mut33,35)。结果:用CCK-8法检测IL-29变异体抗肿瘤活性的结果显示,rhIL-29^mut33,35对肝癌细胞BEL7402、结肠癌细胞HCT8和胃癌细胞SGC7901的增殖均具有抑制作用,高剂量组对这3种肿瘤细胞的增殖抑制率分别为30.99±1.58%、22.47±1.37%和32.05±2.02%。结论:经分子改造获得的变异体rhIL-29^mut33,35抗增殖作用比野生型rhIL-29及商品化的IFN-α2b的更强（p<0.01）,表明变异体rhIL-29^mut33,35具有较好的医药开发价值。更多还原