MiR-125a-5p调控Jurkat细胞内转录因子FOXP3表达的作用机制

【作者】 邱笛； 李劲频； 莫雪安；

【机构】 广西医科大学神经病学研究所； 广西医科大学第一附属医院神经内科；

【摘要】 研究背景:MiR-125a-5p通过调节重症肌无力病人胸腺细胞中的转录因子foxp3转录后表达,而影响重症肌无力的发生发展过程。目前,未有体外验证实验证明miR-125a-5p影响转录因子foxp3的表达。目的:本研究以miR-125a-5p的模拟物和抑制物分别转染jurkat细胞(急性T细胞白血病细胞系),利用荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法(Western Blotting)检测细胞中miR-125a-5p、foxp3 mRNA及蛋白的表达量,证明miR-125a-5p对其靶基因foxp3的调控关系。方法:Jurkat细胞接种于RPMI-1640培养基中,于含5%CO2的37℃恒温培养箱中培养。将对数生长期细胞以106/mL的浓度接种于6孔板中,分别转染阴性对照模拟物、miR-125a-5p的模拟物、阴性对照抑制物及miR-125a-5p的抑制物。荧光定量PCR法检测miR-125a-5p及foxp3 mRNA的相对表达。蛋白免疫印迹法测foxp3蛋白的相对表达水平。结果:1.MiRNA荧光定量PCR结果显示,相比模拟物阴性对照组(0.8031±0.5483),miR-125a-5p模拟物组(6744.1983±2198.0029)的miRNA表达显著上调(P<0.05),相比抑制物阴性对照组(1.9924±0.8990),miR-125a-5p抑制物组(0.0089±0.0072)的miRNA表达显著下降(P<0.05)。2.MRNA荧光定量PCR结果显示,相比模拟物阴性对照组(1.1393±0.1631),miR-125a-5p模拟物组(0.9746±0.1481)的mRNA表达明显下降(P<0.05),相比抑制物阴性对照组(1.0583±0.1371),miR-125a-5p抑制物组(1.3628±0.4002)的mRNA表达明显升高(P<0.05)。3.Western blotting结果显示,相比模拟物阴性对照组(1.1270±0.3277),miR-125a-5p模拟物组(0.8685±0.2849)的foxp3蛋白表达减少(P<0.05),相比抑制物阴性对照组(0.9596±0.4712),miR-125a-5p抑制物组(1.2078±0.6641)的foxp3蛋白表达增加(P<0.05)。结论:1、MiR-125a-5p参与调节jurkat细胞内foxp3的转录后表达。2、Jurkat细胞内miR-125a-5p很可能通过转录后基因沉默机制调控靶基因foxp3 mRNA表达降低,从而降低foxp3蛋白表达。更多还原