HMGB1-A box和EP对SW480细胞TLR4信号通路的影响

【作者】 裴静璇； 黄利兴； 刘东升； 周小江； 周南进； 谢勇；

【机构】 南昌大学第一附属医院消化研究所； 江西省医学科学研究院； 江西省医学免疫与生物治疗重点实验室；

【摘要】 目的:观察HMGBl-A box高表达对SW480肠上皮细胞株LPS/TLR4的影响,为以HMGBl-A box为靶点治疗IBD提供理论和实验依据。方法:培养SW480细胞至对数生长期,给予不同浓度LPS(0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/m1)分别作用12h、24h收集细胞检测HMGB1的表达。HMGB1-Abox高表达和EP(丙酮酸乙酯,HMGB1释放抑制剂)对SW480肠上皮细胞HMGB1、LPS/TLR4信号通路及促炎因子的影响,实验分组:①对照组:SW480细胞;②EP组:SW480细胞+EP;③空质粒组:转染空质粒的SW480细胞;④A box质粒组:转染HMGB1-A box质粒的SW480细胞。上述各组再分为LPS及无LPS处理。(EP为5mM,预处理1h,LPS为1μg/ml,24h),24h后收集细胞培养上清及细胞。结果:1.LPS对SW480细胞内HMGB1的影响:(1)不同浓度的LPS处理SW480细胞12h,SW480细胞HMGB1 mRNA表达都有升高,其中LPS浓度为0.1μg/ml组与对照组相比,有统计学差异(P<0.05);不同浓度LPS处理24h时,SW480细胞HMGB1 mRNA表达都有升高,其中1μg/ml组HMGB1 mRNA表达与对照组相比,有统计学差异(P<0.01),而其它组间HMGB1mRNA表达无统计学差异(P>0.05)。(2)LPS处理SW480细胞不同时间,24h组HMGB1 mRNA表达均高于12h组,但只有1μg/ml组有统计学意义(P<0.05),故本实验选用LPS的处理时间为24h,作用浓度为1μg/ml。2.EP和HMGB1-Abox高表达对SW480细胞LPS/TLR4信号通路及促炎因子分泌的影响(1)各组细胞内HMGB1 mRNA及蛋白表达:HMGB1 mRNA和蛋白的表达在无LPS处理组之间无统计学差异(P>0.05),在LPS处理组EP组显著低于对照组、空质粒组和Abox转染组(P<0.05),后3组之间无统计差异(P>0.05);除EP组,各LPS处理均显著高于相对应的无LPS处理组(P<0.05,0.01)。(2)各组细胞内TLR4 mRNA及蛋白的表达:TLR4 mRNA和蛋白的表达在无LPS处理组之间无统计学差异(P>0.05),在LPS处理组EP组显著低于对照组、空质粒组和Abox转染组(P<0.05),后3组之间无统计差异(P>0.05);除EP组,各LPS处理均显著高于相对应的无LPS处理组(P<0.05,0.01)。(3)各组细胞内pNF-κB p65蛋白的表达:pNF-κBp65蛋白的表达在无LPS处理组之间无统计学差异(P>0.05),在LPS处理组EP组显著低于对照组、空质粒组和Abox转染组(P<0.05),后3组之间无统计差异(P>0.05);除EP组,各LPS处理均显著高于相对应的无LPS处理组(P<0.05,0.01)。(4)各组细胞培养上清中HMGB1、IL-1β、TNF-α和IL-6的含量:①HMGB1的含量在无LPS处理组之间无统计学差异(P>0.05),在LPS处理组EP组显著低于对照组、空质粒组和A box转染组(P<0.05),后3组之间无统计差异(P>0.05);除EP组,各LPS处理均显著高于相对应的无LPS处理组(P<0.01)。②IL-1β、TNF-α和IL-6的含量在无LPS处理组之间无统计学差异(P>0.05),在LPS处理组EP组显著低于对照组、空质粒组和A box转染组(P<0.05,0.01),后3组之间无统计差异(P>0.05);除EP组,各LPS处理均显著高于相对应的无LPS处理组(P<0.05,0.01)。结论:1.LPS可激活SW480细胞TLR4信号通路及上调HMGB1的表达,促进促炎细胞因子分泌。2.EP可以抑制SW480细胞HMGB1的表达和分泌,并抑制LPS/TLR4信号通路及促炎细胞因子分泌。更多还原