超声联合微泡造影剂介导神经营养因子-3基因转染神经干细胞实验研究

【作者】 宫琳； 陈芸； 万圣祥； 江长青； 谭文； 严飞； 郑海荣；

【机构】 北京大学深圳医院超声影像科；

【摘要】 目的探讨体外利用超声联合微泡造影剂介导神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)基因转染神经干细胞的有效性和适宜超声参数。方法体外培养神经干细胞,在24孔板中加入200μl微泡(3×10~8/ml)和20μl pEGFP-NT-3基因重组质粒(1μg/μl)混合静置30 min,将500μl神经干细胞悬液(5×10~5/ml)加入到微泡和质粒混合液中,在不同的超声条件下(声强分别为1 W/cm2,1.5 W/cm2,2 W/cm2,照射时间分别为30 s,60 s,90 s,120 s,150 s),用1 MHz非聚焦探头辐照上述混合液,转染后在荧光显微镜下观察重组质粒转染效率,台盼蓝染色检测神经干细胞活性,空白对照组为无超声辐照的质粒与神经干细胞的混合物。结果 (1)转染24 h后,荧光显微镜下可以观察到少量绿色荧光,36 h后绿色荧光蛋白逐渐增强,48 h荧光表达最强,60 h时表达减少。空白对照组未见到荧光表达;(2)在本实验中,声强1.5 W/cm2、照射时间60 s为适宜的超声条件,此时神经干细胞基因转染率最高,且细胞活性较高。结论超声联合微泡造影剂介导NT-3基因转染神经干细胞具有可行性,为神经干细胞基因转染提供了新方法。更多还原