超声微泡介导Rb94基因转染HXO-Rb44细胞的实验研究

【作者】 郑敏明； 周希瑗； 王丽萍；

【机构】 重庆医科大学附属第二医院眼科；

【摘要】 目的本文通过体外实验研究超声爆破微泡造影剂介导Rb94基因对视网膜母细胞瘤细胞转染效率的研究,以及探讨Rb94基因对视网膜母细胞瘤细胞的作用效果。方法 1.微泡携带Rb94基因转染HXO-Rb44细胞与传统脂质体转染方法进行了转染效率的对比。2.微泡携带Rb94基因转染HXO-Rb44细胞对视网膜母细胞瘤细胞生长活性的影响。结果 1.以0.5W/cm2声强,辐照时间30s的连续波,对HXO-Rb44细胞进行Rb94基因的转染,并同传统的脂质体转染法进行了转染效率的比较。空质粒+微泡+超声组、Rb94质粒+微泡+超声组及Rb94质粒+脂质体组的绿色荧光表达明显高于空白对照组、Rb94质粒+微泡及Rb94质粒+超声组。空质粒+微泡+超声组、Rb94质粒+微泡+超声组及Rb94质粒+脂质体组的转染效率明显高于其他各组,且这三组之间的差异不具有统计学意义。RT-PCR检测结果显示:Rb94质粒+超声+微泡与Rb94质粒+脂质体组的RB94mRNA表达明显强于其他各组。Western blot检测结果显示,Rb94质粒+超声+微泡与Rb94质粒+脂质体组的RB94蛋白含量明显高于其他各组。2.各组细胞的处理方法同前,检测Rb94基因转染后对HXO-Rb44细胞生长活性的影响。Rb94质粒+超声+微泡组与Rb94质粒+脂质体组的MTT值明显小于其余各组。流式细胞仪检测细胞周期结果显示,Rb94质粒+超声+微泡与Rb94质粒+脂质体组G2期细胞随着时间的延长逐渐增多。流式细胞仪检测细胞凋亡率结果显示Rb94质粒+超声+微泡组的细胞凋亡率为28.7%,Rb94质粒+脂质体组的细胞凋亡率为28.6%,明显高于其他各组,两组间的差异不具有统计学意义。结论本实验以超声微泡造影剂为基因载体对体外培养的视网膜母细胞瘤细胞进行抑癌基因的转染,探讨了其对视网膜母细胞瘤细胞生长活性的影响,与传统的转染方法作了转染效率的比较,并检测了Rb94基因对视网膜母细胞瘤细胞生长活性的影响。实验结果提示超声微泡作为一种新型的基因转染介质,可达到高效的基因转染目的。Rb94基因对视网膜母细胞瘤细胞的生长具有明显的抑制作用。然而视网膜母细胞瘤的基因治疗尚处于起步阶段,本实验仅为体内实验积累了一定资料,真正应用于临床还需进一步的研究。更多还原