具有高侵袭力和高稳定表达GFP的膀胱癌细胞的获得

【作者】 杨德林； 宋波； 王剑松； 张超； 徐鸿毅；

【机构】 昆明医学院第二附属医院泌尿外科； 第三军医大学西南医院泌尿外科；

【摘要】 目的:获得具有具有高侵袭力和高稳定表达GFP的膀胱癌细胞。方法:通过构建侵袭小室,以穿透人工基地膜、聚碳酸脂膜能力为依据筛选人膀胱癌细胞EJ的具有体外高侵袭力的膀胱癌细胞亚系EJ-m3。LipofectamineTM2000脂质体介导pPGFP-C1转染人膀胱癌细胞EJ、EJ-m3,经G418抗性筛选和96孔板有限稀释获得高表达GFP的单克隆细胞株。并通过流式细胞仪检测GFP表达量及细胞周期、生长曲线和体外侵袭实验对转染和未转染GFP的细胞的生物学行为进行综合分析。结果:筛选出了具有高侵袭力的膀胱癌细胞EJ-m,并获得了稳定高表达GFP的单克隆细胞株EJ-GFP、EJ-m3-GFP。该两株细胞GFP的表达率均为99.9%,增殖指数、生长曲线和体外侵袭力与未转染前相似。结论:运用改良侵袭实验筛选膀胱癌细胞系的高侵袭力亚系的方法是可靠的;转染GFP后细胞的生物学行为并未发生改变。获得的具有高侵袭力和高稳定高表达GFP的膀胱癌细胞为膀胱癌侵袭及转移的研究提供了良好的实验平台。更多还原