Mdr1基因介导的骨髓移植在小鼠的安全性研究

【作者】 王江波； 王珊； 李圆；

【机构】 重庆医科大学附属儿童医院肿瘤外科；

【摘要】 【目的】了解逆转录病毒介导的 mdr1基因转染造血干细胞在移植后对受体小鼠血液系统方面的安全性影响。【方法】收集携有 mdr1基因的逆转录病毒病毒上清液并转染小鼠骨髓造血细胞;采用 PCR 方法、免疫组化染色法检测 mdr1基因在骨髓单个核细胞中的表达情况;应用1.5Gy 剂量的⁶⁰Co-γ射线照射进行骨髓预处理,在移植后1—2个月应用免疫组化与 RT-PCR 法检测移植了转染有 mdr1基因的造血细胞的 Balb/c 小鼠骨髓单个核细胞中 mdr1基因的表达情况,同时检测骨髓单个核细胞部分重要增殖凋亡因子（bcl-2、Bax、Ki-67、 p53、PCNA）的表达。【结果】 （1）RT-PCR 法证实外源性 mdr1基因可有效地整合到小鼠骨髓单个核细胞基因组中并进行转录表达,免疫组化法测得体外转染细胞 P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）表达的阳性率为22.40±2.35%%;（2）移植了转染有 mdr1基因的造血细胞的受体小鼠1个月与2个月时骨髓 P-gp 表达平均阳性率为7.93%与6.54%;（3）移植转染 mdr1基因单个核细胞组小鼠骨髓单个核细胞的增殖因子 Bcl-2、Ki-67、PCNA 与空白对照小鼠的因子表达没有明显差异（P 值>0.05）;凋亡因子中 p53表达没有明显差异,在空白对照小鼠 Bax 因子表达7.36±0.42%,移植小鼠5.64±0.27%,两者具有明显差异（P<0.01）,致使 Bcl-2/Bax 比值相对于空白对照小鼠组显著升高。【结论】通过逆转录病毒载体可在体外将外源性 mdr1基因转入小鼠骨髓单个核细胞中,转染的 mdr1基因能整合到骨髓单个核细胞基因组中并有功能性表达;mdr1基因转入小鼠骨髓单个核细胞在移植2个月其凋亡因子 Bax 表达降低,Bcl-2/Bax 比值升高,更有利于受体鼠造血的恢复;另一个方面它也同时提出一个问题,即 mdr1基因转染造血干细胞在回输受体后造血过程的增殖凋亡平衡。更多还原