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枯草杆菌来源谷氨酰胺转胺酶在大肠杆菌中表达条件的优化
【机构】 华东师范大学生命科学学院；
【摘要】 本文主要利用分子生物学的方法将含有TGase基因的质粒pET-32a(+)分别转入大肠杆菌 BL21(DE3)和Rosetta(DE3)中进行表达,通过SDS-PAGE不连续电泳,扫描比较两者的量得到在 Rosetta(DE3)中表达的量较多,因而采用Rosetta(DE3)菌株为宿主菌进行下一步实验。在此基础上,对温度、时间,IPTG浓度等表达条件进行了优化。然后在优化后的条件下发酵,取诱导表达的菌液,采用超声波破菌后离心,电泳检测上清和沉淀得到表达的蛋白为可溶性蛋白,取上清用含Ni+的亲和层析介质纯化得到初步纯化的蛋白,并以BSA为底物对TGase的性质进行了研究,初步测得其活性。
【关键词】 枯草杆菌；
谷氨酰胺转胺酶；
可溶性蛋白；
大肠杆菌Rosetta(DE3)；
- 【会议录名称】 华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会论文集
- 【会议名称】华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会
- 【会议时间】2006-10
- 【会议地点】中国浙江杭州
- 【分类号】Q786
- 【主办单位】浙江省生物化学与分子生物学学会、安徽省生物化学与分子生物学学会、福建省生物化学与分子生物学学会、江西省生物化学与分子生物学学会、山东省生物化学与分子生物学学会、上海市生物化学与分子生物学学会、江苏省生物化学与分子生物学学会