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蛇毒金属蛋白酶抑制剂的基因合成与蛋白表达
【机构】 福建医科大学分子医学研究中心；
【摘要】 目的研究蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a)的基因合成及在杆状病毒表达系统的表达。方法根据GenBank中查找的BJ46a基因序列(AF294836),将其分为20个片段,通过缓慢退火PCR法使之拼接为完整的BJ46a基因,经SacⅠ及XhoⅠ双酶切后定向克隆到载体pET-42a(+)中,PCR扩增、酶切及测序鉴定;根据测序结果用定点突变法逐一改正错误位点。进而利用Bac to Bac杆状病毒表达系统,将 BJ46a基因克隆至杆状病毒转座载体pFastBac HTC,以pFastBac HT C-BJ46a重组子转化DH10Bac 感受态细胞,获Bacmid-BJ46a重组子,经Cellfectin脂质体介导转染sf9昆虫细胞,获重组杆状病毒颗粒。以高滴度病毒感染sf9昆虫细胞,通过SDS-PAGE和Western-blot观察BJ46a融合蛋白的表达,并利用ProBond(tm)纯化。结果成功合成BJ46a基因并构建了Bac to Bac杆状病毒表达载体,BJ46a融合蛋白在感染后4天表达量最高,利用ProBondTM可纯化含6×His标签重组融合蛋白。结论 BJ46a基因的合成及在杆状病毒表达系统的成功表达,为进一步研究其生物学功能奠定了坚实的基础。
【关键词】 蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a)；
基因合成；
基因克隆；
基因突变；
杆状病毒表达系统；
- 【会议录名称】 华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会论文集
- 【会议名称】华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会
- 【会议时间】2006-10
- 【会议地点】中国浙江杭州
- 【分类号】Q78
- 【主办单位】浙江省生物化学与分子生物学学会、安徽省生物化学与分子生物学学会、福建省生物化学与分子生物学学会、江西省生物化学与分子生物学学会、山东省生物化学与分子生物学学会、上海市生物化学与分子生物学学会、江苏省生物化学与分子生物学学会