实验性自身免疫性脑脊髓炎脑内I2R受体密度变化初步观察

【作者】 殷为勇； 郑荣远； 朱振国； 邱伟文； 潘建春； 李云峰； 高燕；

【机构】 温州医学院附属第一医院神经科； 温州医学院药学院； 北京军事医学科学院；

【摘要】 目的研究实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)脑内I2R受体密度和亲和力的变化。方法采用,1、EAE模型的诱导:采用豚鼠脊髓匀浆与完全弗氏佐剂制成抗原乳剂诱导EAE组8只 Wister大鼠,对照组6只(注射等量生理盐水加完全弗氏佐剂)。免疫后所有动物每日称体重并进行神经症状评分。根据Matthaei等人的神经症状评分标准加以修改,设定为0～8分的评分法。2、受体膜成分制备:在EAE在发病高峰时全部大鼠断头取脑,加入匀浆液电动搅匀。冰浴匀浆,离心弃上清液,重复清洗,加定量反应液使沉淀蛋白重新悬浮,用考马斯亮蓝G-250法测定每管中蛋白浓度并稀释,-70℃分装保存备用。3、放射性受体-配体饱和实验:总反应体积0．25ml,反应液中含去甲肾上腺素以封闭α2-肾上腺素受体。受体膜蛋白100μg/管加入[3H]Idazoxan(终浓度1．25～40 nmol／L,)标记I2R,非特异结合管加入色拉唑啉,所有管均用反应液补足至终体积250μl。经孵育、冰浴终止反应、样品收集器用纤维滤纸负压抽滤、反应液冲洗3次,分离游离配体和结合配体。滤纸烤干,加入闪烁液,隔夜用β-放射线液闪计数仪记录放射强度,检测EAE大鼠脑内I2R受体密度和亲和力变化。特异结合量=总结合量-非特异结合量,每一结合点均采用双管。取二者的均数作为实验终数据。结果EAE组于免疫后第15天开始发病,发病率为7／8,EAE组的最大症状评分 3．71±1．38。潜伏期为16．29±1．11(d)。EAE组大鼠脑组织咪唑啉I2R受体的解离常数(Kd)和最大受体数量(Bmax)值分别是23．66±2．63 nM和289．5±24．3fmol／mg蛋白(n=3);对照组脑咪唑啉受体的Kd和Bmax值分别是21．81±8．631 nM和171±40．56fmol／mg蛋白(n=3)。受体最大结合数量EAE 组明显上调74．5％(n=3,P<0．05),而受体解离常数(亲和力)两组差异无统计学意义。结论I2R 在EAE大鼠脑组织中受体密度上调。可能与EAE发病有联系。更多还原