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催化吲哚生成靛蓝的细胞色素P450BM-3定向进化研究
【作者】 李红梅； 梅乐和； Vlada Urlacher； Rolf D．Schmid； 姚善泾；
【机构】 浙江大学化学工程与生物工程系； Institute of Technical Biochemistry University of Stuttgart,Stuttgart,Germany；
【摘要】 以催化吲嗓产生的靛蓝在630nm处具有特殊的吸收峰为高通量筛选指标,将来源于 Bacillus megaterium的细胞色素P450BM-3单加氧酶的基因序列用易错聚合酶链式反应进行定向进化,通过多轮突变,在原有的能产靛蓝的高活力突变酶的基础上成功获得了三个高于亲本酶的突变酶,突变酶的酶活分别是亲本酶的6．6倍(hml0001),9．6倍(hml002)和5．3(hml003)倍,并对突变酶的动力学参数进行了分析．突变酶DNA测序的结果表明hml001含有一个有义氨基酸王换139V,hml002含有三个有义氨基酸置换D168N,A225V,K440N,hml003含有一个有义氨基酸王换E435D,这些突变位点有些远离底物结合部位,有些位于底物结合部位的．
【基金】 国家自然科学基金CSC-DAAD国家留学基金中德合作科技人员交流PPP项目浙江省科技计划项目国家教育部留学回国人员基金浙江省留学回国人员基金
- 【会议录名称】 浙江省生物化学与分子生物学学术交流会论文集
- 【会议名称】浙江省生物化学与分子生物学学术交流会
- 【会议时间】2005-11
- 【会议地点】中国杭州
- 【分类号】Q78
- 【主办单位】浙江省生物化学与分子生物学学会、浙江省绍兴市文理学院医学院