小发夹RNA体外抑制HBV表面抗原的表达

【作者】 羊正纲； 陈智； 倪勤； 徐宁； 邵俊斌； 姚航平；

【机构】 浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所；

【摘要】 目的:利用载体系统表达小发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA),诱导RNA 干扰(RNA interference,RNAi)为抗病毒研究提供一种新的方法。方法:构建含乙肝表面抗原和绿荧光蛋白(HBs-GFP)融合基因的载体和表达小发夹RNA(shRNA)的载体,共转染到HepG2细胞中,流式细胞仪检测融合基因的绿荧光表达情况,同时用荧光定量RT-PCR 检测其RNA 水平的改变;选择有效的shRNA 表达载体,转染HepG2.2.15细胞系,放射免疫法检测上清中HBsAg 和HbeAg 的分泌情况。结果:流式细胞仪检测发现针对HBsAg 的shRNA 抑制绿荧光蛋白的表达,抑制率较空载体对照组下降56%,荧光定量RT-PCR 检测结果显示,其mRNA 水平降低明显,抑制率较空载体下降90%。转染HepG2.2.15细胞系后,HBsAg and HBeAg分别下降了43%and 64%。结论:小发夹RNA 可以有效抑制HBVS 基因的表达,同时建立一种可行的筛选RNAi 作用靶位的方法。更多还原