儿童激素耐药型与激素敏感型肾病综合征尿蛋白组学的初步研究

【作者】 黄爱文； 何庆南； 周频； 丁娟娟； 易著文；

【机构】 中南大学湘雅二医院小儿肾脏病研究室；

【摘要】 目的应用二维电泳和质谱分析等蛋白质组学方法筛选和鉴定激素耐药型原发性肾病综合征(SRNS)与激素敏感型原发性肾病综合征(SSNS)尿液中差异表达的蛋白质,寻找可能与原发性肾病综合征激素耐药、激素敏感及疾病预后相关的蛋白质。方法研究对象共20例,其中,治疗前和治疗后SSNS各5例、SRNS 5例、正常对照组5例,提取尿液全蛋白,采用固相pH梯度双向凝胶电泳(2-DE)方法,建立尿液全蛋白凝胶图谱;应用投射扫描仪对银染色后的凝胶图进行扫描,使用Image Master 2D V3.01分析软件分析和识别差异表达蛋白质点,利用基质辅助激光解吸,电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)得到差异蛋白质点的肽质量指纹图谱(PMF),通过Mascot软件进入NCBI数据库,鉴定出差异表达的蛋白质。结果正常对照组、SSNS治疗前组、SSNS治疗后组和SRNS组尿液2-DE凝胶的蛋白质平均检测点分别为105±7个、204±5个、55±5个和206±8个。SRNS组与SSNS治疗前组尿液2-DE凝胶比较筛选出差异蛋白质点66个,其中,仅存在于SRNS组的蛋白质点24个、仅存在于SSNS治疗前组的蛋白质点27个;SSNS治疗后组与正常对照组尿液2-DE凝胶比较筛选出差异蛋白质点75个,其中,仅在SSNS治疗后组出现的蛋白质点11个。本实验对其中18个差异明显的蛋白质点进行了MALDI-TOF-MS分析,鉴定出9类差异表达的蛋白质:①白蛋白结构3区与一个针对Bcl-xL和Bcl-2的抗凋亡配体的复合物;②白蛋白前体;③Igκ链NIG26前体;④α1-抗胰蛋白酶:⑤与Vegfα1-抗胰蛋白酶形成复合物的噬菌体来源的Fab片段;⑥转铁蛋白:⑦一个具有广泛的中和抗艾滋病毒-1抗体晶体结构与模拟肽的复合体;⑧甘露聚糖结合凝集素.相关蛋白19(Map19):⑨带异类电荷的糖蛋白复合体(protein HC)。结论成功鉴定了SRNS和SSNS存在9类差异表达的蛋白质,其中,尿液中自蛋白结构3区与一个针对Bcl-xL和Bcl-2的抗凋亡配体的复合物及白蛋白前体可能是SRNS的标志物;尿液中α1-抗胰蛋白酶和转铁蛋白可能是SSNS的标志物,protein HC和Map19可能与INS的预后与转归有关。更多还原