风疹病毒RNA Taqman实时荧光定量RT-PCR参考标准的建立

【作者】 赵立红； 赵书平； 文汇；

【机构】 泰安市中心医院检验科；

【摘要】 目的建立风疹病毒RNA Taqman实时荧光定量RT- PCR方法,制备风疹病毒RT-PCR扩增子作为该方法的参考标准品,并对其进行方法学评价。方法:设计引物与探针,优化PCR条件,制备风疹病毒RT-PCR扩增子作为建立的风疹病毒RNA实时荧光定量RT-PCR的参考标准品,对该方法的检测灵敏度与重复性进行检测与评价。结果:制备的风疹病毒特异性扩增子参考标准品为503bp的片断,原液浓度为2.75×109 copie/μl,采用该特异性扩增子参考标准品建立的标准曲线相关系数为-0.9960,建立的方法检测灵敏度为2.75×102 copies/反应,将扩增子参考标准品进行一系列稀释,对每个稀释度进行3次重复检测,来对其重复性进行评价,该方法重复性高,循环阈值(cycle threshold,Ct)变异系数范围:1.25%-3.58%。结论:本研究建立的风疹病毒特异性扩增子参考标准品浓度的对数值与Ct值之间具有良好的线性关系,建立的风疹病毒RNA实时荧光定量RT-PCR方法简便快捷、特异性高、定量准确、敏感性好。更多还原