脓毒症大鼠中药解毒化瘀治疗前后凝血调节蛋白基因表达的变化

【作者】 张道杰； 吴玉生；

【机构】 济南金域医学检验中心有限公司； 山东大学西区医院；

【摘要】 背景目前,对脓毒症的研究主要集中在脓毒症相关细胞因子、黏附因子的相互作用、表达调控及基因多态性等方面,虽然取得了一定的成果,但其发病机制仍未阐明,特别是治疗方面,尚未找到特效治疗措施。近来凝血机制异常在脓毒症发病机制中的作用日益受到关注,本研究试图通过脓毒症动物模型,借助分子生物学技术,从凝血调节机制这一角度揭示脓毒症这一重大疾病广泛性毛细血管内凝血发生的病理生理学机制,从而为脓毒症的防治提供新的靶点和新的视野。中医中药是我国的医药宝库,博大精深,在一些疑难病的防治中起着独特的作用,本研究拟通过动物实验观察凝血调节蛋白基因的表达变化来揭示解毒化瘀验中药治疗脓毒症的分子基础。目的:从分子水平、基因水平探讨脓毒症凝血调节机制异常的原因,为脓毒症的防治寻找新的靶点;观察解毒化瘀治疗脓毒症的效果和治疗后凝血调节蛋白在基因表达的变化,试图揭示中药解毒化瘀治疗脓毒症的分子基础。方法:1、采用盲肠结扎穿刺法复制大鼠脓毒症模型;2、建立PC,PS,TM,GAPDH mRNA实时荧光定量PCR检测方法;3、采用实时荧光定量PCR法检测脓毒症形成发展过程中PC,PS及TM基因mRNA表达;4、采用血凝仪法和ELISA法检测脓毒症形成发展过程中血浆PC,PS活性及TM含量;5、解毒化瘀中药组方,并通过灌胃和腹腔注射治疗脓毒症大鼠;6、采用实时荧光定量PCR法检测脓毒症大鼠中药解毒化瘀治疗后PC,PS及TM mRNA表达,并和对照组进行对比分析;7、采用血凝仪法和ELISA法检测脓毒症大鼠中药解毒化瘀治疗后血浆PC,PS活性及TM含量,并和对照组进行对比分析。结果:1、成功复制了大鼠脓毒症模型;2、成功建立了PC,PS,TM,GAPDH mRNA实时荧光定量PCR检测方法;3、在脓毒症形成和发展过程中,蛋白C系统在基因表达的mRNA水平和蛋白水平均存在异常;4、脓毒症大鼠经中药解毒化瘀治疗后,其PC mRNA及血浆PC活性均显著高生理盐水对照组,其血浆TM含量显著低于生理盐水对照组。结论:1、首次应用实时荧光定量PCR方法揭示了脓毒症形成和发展过程中PC,PS,TM基因表达变化规律;2、揭示了脓毒症凝血机制异常的分子机制;3、提出了对脓毒症大鼠确有疗效的解毒化瘀中药组方。4、首次发现,解毒化瘀中药能增强脓毒症大鼠PC mRNA表达、提高血浆PC活性、修复损伤的血管内皮细胞,从而揭示了解毒化瘀验中药治疗脓毒症的分子基础。更多还原