雌激素和雷洛昔芬对大鼠血管平滑肌细胞增殖及cyclinD1基因表达的影响

【作者】 杨发林；

【机构】 山东大学齐鲁医院检验科；

【摘要】 目的观察雌激素和雷洛昔芬对原代培养的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响.并检测cvclinD1 mRNA和蛋白表达的变化.方法:1.原代培养大鼠主动脉平滑肌细胞.传至4～10代用于实验。2.采用MTT法测定不同浓度的雌激素、雷洛昔芬和ICI182.780对原代培养的大鼠主动脉VSMCs增殖的影响。3.采用SP法观察10-8mol/L雌激素和雷洛昔芬对VSMCs增殖性细胞核抗原(PCNA)的影响。4.采用流式细胞仪观察10- 8mol/L雌激素和雷洛昔芬对VSMCs细胞增殖周期的影响。5.采用RT-PCR和Western Blot方法分别检测雌激素和雷洛昔芬处理后大鼠主动脉平滑肌细胞cvclinD1基因mRNA及蛋白表达水平的变化情况。6.构建cyclinD1基因启动子荧光素酶表达系统,转染VSMCs.观察雌激素和雷洛昔芬对cyclinD1启动子转录活性的影响。结果:1.MTT法检测显示VSMCs经10-8mol/L雌激素和雷洛昔芬处理后增殖活性下降,抑制率分别为20%和26%,完全性雌激素受体阻断剂ICI182.780消除了雌激素和雷洛昔芬的抑制效应,并在高浓度(10-5 mol/L)时显著促进VSMCs增殖。2.10- 8mol/L的雌激素和雷洛昔芬降低了VSMCs中PCNA的蛋白水平。3.流式细胞仪结果显示10-8mol/L雌激素和雷洛昔芬能阻滞细胞周期从G1期进入S期.雌激素处理后,G1期所占比例由70.0%增加为78.5%,S期所占比例由22.0%降为14.2%;雷洛昔芬处理后.G1期所占比例由69.0%增加为79.1%,S期所占比例由19.8%降为10.2%,并可见较小的凋亡峰。4.经10-8mol/L雌激素和雷洛昔芬处理后VSMCs的cvclinD1基因mRNA和蛋白水平均显著下降。5.经10-8mol/L雌激素和雷洛昔芬处理后VSMCs的cyclinD1基因启动子荧光素酶比活性显著下降。结论:雷洛昔芬可抑制血管平滑肌细胞cvclinD1启动子转录活性.抑制cyclinD1基因mRNA和蛋白水平表达.使VSMCs的细胞周期阻滞于G1期,从而抑制VSMCs增殖。更多还原