多细胞株微量培养法在病毒性脑炎、脑膜炎患儿病原学检测的应用研究

【作者】 王世富； 刘霞； 张乐玲； 张乐海； 沈琮； 孟红；

【机构】 山东大学齐鲁儿童医院儿研所； 山东省医学科学院；

【摘要】 目的探讨用多株细胞微量培养法在病毒性脑炎、脑膜炎病原学检测中的应用价值。方法将126份脑脊液(CSF)标本经0.2μm的滤膜过滤除菌后,分别接种于含有青霉素(1000IU/ml)和链霉素(1000IU/ml)的微量细胞培养板中的单层细胞上,每份标本平行接种8株细胞,细胞株包括:MA104、MDCK、HEL、HEK293、Vero、Heo-2、Hela、BHK-21。5%的CO2培养箱中37℃恒温静止培养,每日比较接种病毒组与正常细胞对照组细胞形态差异,当细胞病变(CPE)达标后,传代3次后认为获得稳定的病毒株。以肠道病毒(EV)组合血清来鉴定病毒性脑炎、脑膜炎最常见的病毒类型,未能定型的病毒株再分别用腺病毒(ADV)、单纯疱疹病毒(HSV-ⅠHSV-Ⅱ)、巨细胞病毒(CMV)、流感病毒(INF)单价血清进行鉴定。结果126例病毒性脑炎、脑膜炎患儿共分离到病毒82例(63.0%):其中MA104阳性率为57.1%(72/126),MDCK阳性率为19.8%(25/126),HEL阳性率为11.9%(15/126),HEK阳性率为293 7.1%(9/126),Vero阳性率为6.3%(8/126),Hep-2阳性率为4.8%(6/126),Hela阳性率为4.0%(5/126),BHK21阳性率为2.4%(3/126)。MA104的分离率与其它7种细胞的分离率差异有统计学意义。82例病变细胞经血清学鉴定,鉴定出病毒株78例,病毒的鉴定率为92.8%(78/82),这些病毒中EV所占比例最高,为54例(69.2%);其次是ADV 9例(11.5%),HSV-?为4例(5.1%)和HSV-11为5例(6.4%);EB为4例(5.1%),INF为2例(2.6%)。结论经相应血清学的鉴定,在本实验采用的细胞中,MA104细胞是分离脑脊液中病毒最敏感的细胞,可以作脑脊液中病原分离的首选细胞;采用MA104细胞联合多株细胞用于临床标本的病毒分离,可以提高细胞病变出现率;肠道病毒仍然是引起病毒性脑炎、脑膜炎的最常见的病原。多株细胞微孔板培养法对进行脑脊液的病毒分离,方法有操作简便、易于观察、省时省物、分离率高等优点,具有推广应用的意义。更多还原