体外导入外源IL-10基因对HSC Ⅰ、Ⅲ胶原分泌的影响

【作者】 胡良凯； 梁立维； 张建民； 孙巧玲； 李定国；

【机构】 上海市杨浦区市东医院； 上海交通大学附属新华医院；

【摘要】 <正>目的利用重组复制缺陷型腺病毒 AdIL-10将外源 IL-10基因导入肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)并观察其对 HSCⅠ、Ⅲ胶原分泌的影响。方法 (1)从 SD 大鼠脾组织中分离出单核细胞, 培养48小时后抽提脾单核细胞总 RNA,根据 GenBank 中的基因序列,分别设计特异性的 IL-10上下游引物,通过 RT-PCR 获得鼠 IL-10 cDNA 片段,并克隆入 PMD-18T 载体进行测序鉴定。(2)以测序正确的重组测序质粒 PMD-18T-IL-10为模板重新设计 IL-10引物,两端缀加 HindⅢ和 KpnⅠ的酶切位点,扩增 IL-10 eDNA 片段,再次克隆入 PMD-18T 载体测序证实。(3)用 HindⅢ和 KpnⅠ将 PMD- 18T-IL-10与 pAdTrack-CMV 双酶切,再把双酶切产物连接成 pAdTrack-CMV-IL-10。(4)用 Pme I更多还原