UCH-L1在MCF-7和MCF-7/AdrR细胞中的差异表达与P-gp、MMPs和EMMPRIN关系的初步研究

【作者】 王文娟； 李清泉； 樊洁； 徐璟达； 陈琦； 唐峰； 许祖德；

【机构】 复旦大学上海医学院病理系； 复旦大学附属华山医院病理科；

【摘要】 目的观察泛素羧基末端水解酶1 （UCH-L1）在 MCF-7和 MCF-7/AdrR 细胞中的差异表达,与 P-糖蛋白（P-gp）,基质金属蛋白酶（MMPs） 和基质金属蛋白酶诱导物（EMMPRIN,CD147） 等指标表达变化的关系。方法采用逐步增加剂量和大剂量冲击相结合的方法,以阿霉素为诱导物诱导 MCF-7产生耐药,在耐药性诱导过程中,观察 UCH-L1 mRNA 和蛋白水平的变化,同时对 MCF-7 和 MCF-7/AdrR 细胞总蛋白进行双向电泳,观察 UCH-L1蛋白水平变化情况。采用脂质体法瞬时转染 UCH-L1真核表达质粒处理 MCF-7细胞和阿霉素诱导的低浓度耐药细胞（1μg/ml）,及采用 UCH-L1 Stealth^TM siRNA 处理 MCF-7/AdrR 细胞,实时定量 PCR 和免疫印迹法检测 UCH-L1、P-gp、CD147、 MMP1、MMP2和 MMP9的表达情况。结果阿霉素诱导 MCF-7细胞产生耐药性过程中,不论在 mRNA 水平还是蛋白水平 UCH-L1表达均增加,且具有药物浓度依赖性。MCF-7和 MCF-7/AdrR 细胞总蛋白双向电泳结果进行质谱分析,发现在 MCF-7/AdrR 细胞中 UCH-L1蛋白表达增高。MCF-7 细胞和阿霉素诱导的低浓度耐药细胞（1μg/ml）瞬时转染 UCH-L1质粒后,UCH-L1、P-gp、CD147、 MMP1、MMP2和 MMP9在 mRNA 和蛋白水平表达均增加。UCH-L1 Stealth^TM siRNA 干扰 MCF-7/AdrR 细胞中 UCH-L1基因表达后,UCH-L1、P-gp、 CD147、MMP1、MMP2和 MMP9在 mRNA 和蛋白水平表达均降低。结论文献报导与我们课题组前期实验结果表明,P-gp 和 CD147主要通过泛素-蛋白酶体途径降解；MCF-7/AdrR 细胞中 UCH-L1表达升高,可能通过去泛素化作用阻断 P-gp 与 CD147的降解,也可能通过激活或者保护对 P-gp、CD147和 MMPs 基因有活化作用的信号通路蛋白,进而导致 P-gp、CD147和 MMPs 的升高,促进肿瘤细胞耐药与浸润、转移的发生。更多还原