VEGF基因修饰C17．2神经干细胞移植治疗脑梗死的实验研究

【作者】 沈庆煜； 肖颂华； 黎祥喷； 李梅； 吕瑞妍； 王艺东； 陶恩祥； 彭英； 邢诒刚；

【机构】 中山大学附属第二医院神经内科；

【摘要】 目的:探讨VEGF基因修饰神经干细胞移植治疗脑梗死大鼠模型的治疗效应,以及基因的表达情况和神经保护作用。方法:通过腺病毒载体介导VEGF165基因体外转染C17．2神经干细胞。原位杂交法和ELISA法检测鉴定 pAdCMV VEGF165转染C17．2神经干细胞基因表达情况。腔内线栓法建立大鼠大脑中动脉阻断的局灶性脑缺血模型 (MCAO),随机分组为A组:对照组,n=12;B组:VEGF基因治疗组,n=14;C组:C17．2神经干细胞移植组,n=18;D组:联合治疗组,n=18。立体定向法将细胞移植至脑梗死的半暗带区。各组分别移植前,移植后1周、2周、1月进行MNSs评分神经功能缺损评分。C、D组在移植后2周、1月各取2只大鼠行冰冻切片,行C17．2神经干细胞荧光示踪检查,了解移植后NSCs 存活、移行情况。各组在移植后2周、1月各6只大鼠行组织病理学和NSE、CD31免疫组化检查,观察细胞存活分化和血管新生情况。结果:移植后2周、1月可见Dil18荧光阳性细胞已移行至周围神经组织。移植后2周、1月C、D组的NSE阳性细胞数较A组明显增多(P<0．05),其中以D组更为明显(P<0．05);自移植后第2周起,B、C、D组MNSS评分均较A组明显减少(P<0．05),其中以D组最为明显(P<0．05)。自移植后第2周起,B、D组脑梗死灶周围血管数较A组明显增多(P<0．05), 以D组更为明显(P<0．05)。结论:转染VEGF基因的C17．2神经干细胞移植治疗MCAO脑梗死模型,移植后的C17．2神经干细胞可在脑内存活、移行并可向神经元细胞分化。转染VEGF基因的C17．2神经干细胞移植治疗MCAO脑梗死模型,可促进新生血管形成,改善神经功能。C17．2神经干细胞移植联合VEGF基因治疗治疗效果优于单纯的C17．2神经干细胞移植或VEGF基因治疗。更多还原