重组人乙酰胆碱受体a亚基1-210诱导实验性重症肌无力模型

【作者】 许文华； 许功林； 陈兵； 鲁云霞； 任明山；

【机构】 安徽医科大学附属省立医院神经内科； 安徽医科大学医学分子生物学实验室； 安徽医科大学生化教研室；

【摘要】 目的:重症肌无力(MG)是一种主要累及神经肌肉接头突触后膜乙酰胆碱受体,由乙酰胆碱受体抗体(AchR- ab)介导的自身免疫性疾病,致残率高,严重危害人类健康,寻找有效手段治疗一直是研究者努力的方向。实验性重症肌无力(EAMG)是其基础研究的动物模型;但构建该模型的经典方法是由电鳗电器管中提取纯化的AchR作为免疫原,操作烦琐且费用昂贵,因此寻找构建该模型的新方法成为当务之急。用人工合成的肽段作为免疫原诱导EAMG模型是近几十年来研究者们一直追求的目标;但可能由于肽段多在20残基左右、免疫位点较少、免疫原性相对较弱、成模率低,不能成为理想的动物模型。AchR CL亚基的N端细胞外区域1-210-位残基包含了Ach配体的结合位点和主要免疫原区,是MG致病的关键区域,可以推测该段可作为有效的免疫原。本研究采用分子克隆和表达技术重组hAchR C1-210片段,并用其免疫 Lewis鼠成功诱导EAMG-,希望为MG的基础研究提供一个简便、易行的实验动物模型。方法:本研究参照构建EAMG模型的知名专家LenilionVA的文献并加以改进,首先RT-PcR扩增出目的基因片段AChRⅡ1．210,然后将构建的表达载体在大肠杆菌中诱导表达,最后将表达的产物作sDs．PAGE和免疫鉴定确认为l’hAChR a1．-210,,接着将凝胶上的r’ AChR O【1-210融合蛋自与完全氟氏佐剂(CFA)充分乳化后,经皮下多点注入6-8周龄雌性Lewis鼠。观察免疫后鼠体重的变化,并给予Lennon临床评分;低频重复电刺激检查阳性电衰减反应和ELIsA法检测血清AchR．ab滴度阳性作为评价造模是否成功的客观依据。结果:将成功表达的hAchR-210融合蛋白免疫Lewis鼠,通过相关指标证实实验组70％鼠被成功诱导出EAMG模型。结论:采用rhAChRα1-210融合蛋白可成功诱导EAMG动物模型,并具有实验方法简单、成本相对较低、免疫原充足和动物成模率高等优点。更多还原