Nicastrin基因新选择性剪接与阿尔茨海默病的相关性研究

【作者】 钟望涛； 赵斌； 陈煜森； 山县英玖； 满田憲昭； 三木哲郎；

【机构】 广东医学院附属医院神经内科研究室； 日本爱媛大学医学部老年医学讲座；

【摘要】 目的:淀粉样斑块的主要成分-β淀粉样多肽(β-amyloid,Aβ)是由β淀粉样前蛋白(APP)分别通过β分泌酶 (β-secretase)和γ分泌酶(γ-secretase)作用后生成。研究表明Nicastrin(NCSTN)是γ分泌酶复合物(γ-secretase complex) 的组分之一,后者还包括PS1,PS2,APH-1和PEN-2。同时,大量研究显示NCSTN在γ分泌酶复合体激活、Aβ产生及AD 发病中具有重要作用,本研究通过探讨Nicastrin基因转录产物的选择性剪接与阿尔茨海默病的相关性进一步揭示该基因在AD发病中的潜在意义。方法:23例研究对象均来自日本爱知县丰桥市福祉村病院的住院患者,包括病理确诊的10例 AD患者与13例非AD对照,尸检脑标本并称重,使用苯酚-氯仿法从脑组织中提取DNA,同时PCR-RFLP法进行APOE 基因分型,使用Trizol试剂盒从冰冻海马组织中抽提总RNA,superscript Ⅱ Rnase H反转录酶(Invitrogen)合成cDNAs第一链,RT-PCR法检测海马区Nicastrin基因转录产物的选择性剪接,采用BigDye Terminator V1．1 Sequencing Standard Kit 对剪接产物进行序列分析,统计对比分析Nicastrin基因选择性剪接、APOE基因多态性与AD的相关性。结果:在上游引物 NCSTN4-F和下游引物NCSTN4-R的RT-PCR反应体系里,我们发现Nicastrin基因上的一个新的选择性剪接转录产物- NCSTN△E16(214bp DNA带(突变型)),该转录产物导致其跨膜结构域上游71个氨基酸缺失,发生比率为47．8％,其中 AD组中阳性率为60％(6/10),非AD组中为38％(5／13),两组经Fisher精确概率检验无显著性差异(p=0．41)。另外在 APOE-ε4携带者中有6例检出NCSTN-△E16,在非APOE-ε4携带者中检出5例,NCSTN-△E16阳性率独立于APOEε4 等位基因(p=0．81);当在APOE-ε4携带者中分析时发现,8例AD患者中检出5例,而在5例非AD中仅有1例,即AD中选择性剪接率明显高于非AD,但这一相关性没有显示出统计学意义(p=0．90)。结论:NCSTN新的剪接变异NCSTN-△E16 与病理确诊的迟发型AD并不相关,但由于受样本量及样本选择的限制,很有必要进一步深入研究并联合功能分析去阐明其在AD发病中的真正作用。更多还原