人工寒潮促发脑卒中发病的机制的实验研究

【作者】 林健雯； 黄如训； 施晓耕； 刘春岭； 解龙昌；

【机构】 中山大学附属第一医院神经科；

【摘要】 目的:1)不同血压水平对血浆凝血酶激活的纤溶抑制物(thrombin-activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI)、蛋白 C(protein C,PC)、vWF、凝血酶-抗凝血酶复合物(thrombin-antithrombin complexes,TAT)、纤溶酶-α2-抗纤溶酶(plasmin/ α2-anti-plasmin,PAP)以及内皮vWF、VCAM-1、ICAM-1、P-选择素的影响;2)不同血压水平下寒潮对血浆TAFI、PC、vWF 以及内皮vWF、VCAM-1、ICAM-1、P-选择素的影响。方法:应用双肾双夹法复制RHR模型,术后12周形成稳定高血压后, 正常血压组与RHR组各分为寒潮和非寒潮两大组。寒潮组置于人工气候箱中,温度设置以22℃12小时,4℃12小时为1天循环,共3天。非寒潮组置于温度22℃的人工气候箱共3天。正常血压大鼠以及160mmHg-199mmHgRHR、200mmHg- 219mmHgRHR、≥220mmHg RHR寒潮和非寒潮组各12只。静脉取血抗凝,4℃离心,收集血浆,-80℃保存,ELISA或发色底物法检测血浆TAFI、PC、vWF、TAT、PAP水平。已取血的大鼠,灌注后断头取脑,由嘴侧至尾侧每2毫米切成一冠状薄片,嘴侧2毫米脑片置于冻存管中,-80℃保存,备做实时荧光定量RT-PCR。取视交叉层面作以下处理:1)每亚组6只视交叉层面连续石蜡切片,每8张取1张切片作免疫组化检测血管内皮的vWF、ICAM-1、VCAM-1、P-选择素的蛋白表达,其余切片作 HE染色,了解是否有卒中病灶;2)每亚组6只视交叉层面冰冻切片机连续切片,每8张取1张切片作原位杂交检测血管内皮的ICAM-1、VCAM-1、P-选择素的mRNA表达,其余切片作HE染色,了解是否有卒中病灶。视交叉层面以外脑片连续石蜡切片,HE染色,了解是否有卒中病灶。结果:1．剔除脑卒中的各血压组大鼠经人工气候箱处理后血浆vWF、TAFI、PC、 TAT、PAP水平、脑血管的vWF的mRNA表达(目的片段拷贝数／GAPDH拷贝数,VWF／GAPDH)与蛋白表达、脑血管的 VCAM-1、ICAM-1、P-选择素的mRNA表达(比较原位杂交阳性信号及实时荧光定量RT-PCR,目的片段拷贝数/GAPDH 拷贝数,VCAM-1／GAPDH、ICAM-1／GAPDH、P-选择素／GAPDH)与蛋白表达变化趋势一致如下:1．1在<220mmHg血压组,寒潮组的血浆vWF、TAFI、PC、TAT、PAP水平、脑血管内皮vWF、VCAM-1、ICAM-1、P-选择素的mRNA表达与蛋白表达比非寒潮组均有升高趋势。在≥220mmHg血压亚组,寒潮组的上述指标比非寒潮组均有降低趋势。1．2在非寒潮组, 血浆vWF、TAFI、PC、TAT、PAP水平、脑血管内皮vWF、VCAM-1、ICAM-1、P-选择素的mRNA表达与蛋白表达均随血压升高而升高。在寒潮组,上述指标在<220mmHg时均随血压升高而升高,然而在≥220mmHg时转为降低。2．脑卒中后的血浆TAFI、PC、TAT、PAP、vWF水平及脑血管内皮粘附分子的mRNA表达、蛋白表达均与卒中前不同,脑梗死与脑出血之间的上述各种因子的表达也不同。结论:1．脑血管内皮损害对脑卒中发作起重要作用。2．寒潮可加重脑血管内皮损害,寒潮后脑卒中发生率增高。3．本研究中细胞粘附分子、凝血、纤溶以及血压各个指标的变化趋势的一致性提示长期持续的高血压损害了RHR大鼠各个系统的调控功能,血压越高调控功能越差,当有诱因存在时,调控功能衰竭,易卒中状态更加明显。更多还原