乙型肝炎病毒启动子调控的EGFP真核表达载体的构建及鉴定

【作者】 王晓燕； 谢娜； 林菊生；

【机构】 华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所；

【摘要】 <正>目的:构建并鉴定由乙型肝炎病毒Pre-s,S,C,X各基因启动子调控下的EGFP真核细胞表达载体,是下部用各重组质粒转染真核细胞测定GFP(绿色荧光蛋白)表达量的前期工作。方法:应用含有完整乙型肝炎病毒3．5Kb线性的mRNA逆转录单元的P3．6Ⅱ质粒作为模板,PCR方法扩增乙型肝炎病毒四个启动子片断。扩增后行电泳,位置正确后胶回收扩增片段。胶回收所得片段插入pGEM-T载体,即得重组T载体质粒。将重组 T载体质粒行ACC65I及AGEI双酶切鉴定,根据酶切后小片段位置可初步判定重组T载体质粒为含有相应启更多还原