乙型肝炎病毒C型重组杆状病毒的构建及鉴定

【作者】 于德敏； 张欣欣； 张东华； 陆志檬； 詹勤； 姜节洪； 宋建华； 陈新文；

【机构】 上海市瑞金医院感染科； 中国科学院武汉病毒研究所；

【摘要】 目的构建乙型肝炎病毒(HBV)中国株及其拉米夫定耐药相关变异株的重组杆状病毒。方法将1．2倍HBV基因组(血清adr型、基因C型)连接至杆状病毒的转移载体pFastBacI上,然后转化入DH10Bac菌株中,在细菌内的辅助质粒辅助作用下与杆状病毒基因组Bacmid发生位点特异性转座,形成含有HBV基因组的重组Bacmid,转染昆虫sf9细胞后,包装产生 HBV重组杆状病毒vAcHBVc。采用连续PCR引入方法进行定点突变,构建YVDD变异株质粒,并按照上述方法构建HBV YVDD 变异株重组杆状病毒vAcHBVYVDD,扩增并滴定。为便于观察重组杆状病毒的转染和扩增效率及病毒滴度测定,同时构建了含绿色荧光蛋白的HBV重组杆状病毒vAcGFPHBVc。结果 HBV野毒株和变异株重组杆状病毒均构建成功,通过免疫空斑及 TCID50定量测定病毒滴度为106-108pfu／ml左右。结论应用Bac to Bac杆状病毒表达系统可有效快速地构建HBVC型重组杆状病毒,以用于HBV体外复制系统的建立,为HBV野毒株及变异株生物学特性的研究及抗病毒药物的筛选提供技术平台。更多还原