人酪氨酸酶及酪氨酸酶相关蛋白交叉抗原表位肽的表达、纯化及生物学活性鉴定

【作者】 关翠萍； 李永伟； 尉晓冬； 张迪敏； 许爱娥；

【机构】 杭州市第三人民医院皮肤科；

【摘要】 <正>目的表达人酪氨酸酶及酪氨酸酶相关蛋白的交叉抗原表位肽并纯化蛋白,获得具有生物学活性的抗原表位肽。方法目的基因克隆至原核表达载体pGEX-4T-2,转化E．coli BL21菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE分析和Western blotting鉴定目的蛋白的表达,ELISA检测其生物学活性。结果成功构建了重组表达载体,SDS-PAGE和Westem blotting结果表明重组蛋白成功表达。应用凝胶分析系统分析蛋白表达量发现,目的蛋白的表达量占菌体总蛋白的90％。融合蛋白经过试剂盒纯化后,更多还原