胰蛋白酶法和曲拉通法去除瓣膜细胞的效果比较

【作者】 王克学； 张镜方； 詹秋鹏； 简旭华；

【机构】 广东省心血管病研究所心脏外科；

【摘要】 目的去细胞的异种或同种瓣膜是组织工程心脏瓣膜支架的主要来源,胰蛋白酶法(Trypsin,以下称胰酶法) 和曲拉通法(Triton-x100)是最常用的两种去细胞方法,文献中对这两种方法的优劣争论不一,本研究对这两种方法进行了比较。方法随机选取广州市场上的杂种家猪24头,宰杀后20 min内清洁条件下取出心脏,共获得主动脉瓣膜片 72片,随机分为胰酶法处理组、曲拉通法处理组和对照组,每组24片。处理组分别置入0．05％胰酶处理溶液和0．25％曲拉通处理液,37℃持续振荡,8 h和16 h更换处理溶液,处理48小时。对照组未经处理。行苏木精-伊红染色光镜观察,电子扫描显微镜检查,作热皱缩温度和抗张强度测定。结果1．大体观察两种去细胞方法处理后瓣膜均变软,但能维持接近正常形态,弹性接近正常瓣膜,无明显差别。2．苏木精-伊红染色对照组猪主动脉瓣表面为内皮细胞,中间为胶原纤维和纤维母细胞。胰酶法去细胞瓣中未见细胞及其碎片成分,纤维层、海绵样层和心室层的结构清晰可辨,纤维网架结构保持完整。曲拉通法处理的瓣膜看不到细胞及其碎片成分,纤维层、海绵样层和心室层的结构不能分清,纤维网架结构较为松散。3．扫描电子显微镜观察对照组猪主动脉瓣表面密布内皮细胞,呈铺路石样。胰酶法去细胞猪主动脉瓣表面胶原卷曲呈波浪状,排列整齐、致密,未见细胞及其碎片成分;胶原纤维结构完整、清晰,无破坏。曲拉通法去细胞猪主动脉瓣见内皮细胞和间质细胞完全被去除,支架结构散乱,部分胶原纤维断裂。4．热皱缩温度和抗张强度测定胰酶法组合对照组无显著性差异(P>0．05),而曲拉通组热皱缩温度降低,断裂强度下降,断裂拉伸率减小,与另外两组相比均有显著性差异(P<0．05)。结论胰酶法去除猪主动脉瓣膜细胞彻底,保持了瓣叶支架结构,优于曲拉通法。更多还原