尾加压素Ⅱ对人类脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

【作者】 史力斌； 丁文惠； 王志坚； 高炜； 唐朝枢；

【机构】 北京大学第一医院心内科；

【摘要】 目的观察UII对于培养的脐静脉内皮细胞增殖以及生长因子缺乏和TNFα诱导的凋亡的影响,明确这些过程中ERK1/2及p38MAPK的表达和活性变化。方法进行人脐静脉内皮细胞原代培养,选取4-7代细胞进行实验。应用细胞计数描记生长曲线及3H-TdR掺入法测定细胞增殖。应用MTT法测定存活细胞数目,应用流式细胞术(PI染色及AnnexinV-PI双染)及TUNEL染色法测定细胞凋亡。应用考马斯亮蓝法测定蛋白浓度,应用WesternBlot测定ERK1/2及p38MAPK的表达及活性。结果(1)应用UII(10-10-107mol/L)刺激脐静脉内皮细胞引起细胞增殖(细胞计数上升,3H-TdR掺入增加)。(2)撤血清及生长因子24小时经MTT法测定活细胞数目下降,经流式细胞数及TUNEL染色测定凋亡较对照明显增加(分别为12.08%±5.12%比4.64%±1.27%,13.20%±1.96%比4.40%±0.62%,P<0.01),单纯加入UII(10-9mol/L,10-7mol/L)不引起细胞数目的明显改变(P>0.05),在撤血清背景下加入UII(10-9mol/L,10-8mol/L,10-7mol/L),用流式细胞术检测可观察到凋亡比率下降(4.87%±1.21%,5.05 9,6±1.85%,5.71%±2.22%比12.08%±5.12%,P<0.01),选取UIl10-8mol/L剂量重复实验,以TUNEL染色法检测获得相似结果(5.74%±0.64%比13.20%±1.96%,P<0.01)。(3)TNFα(30ng/ml)孵育24小时经MTT法测定活细胞数目下降,经流式细胞数及TUNEL染色测定凋亡较对照明显增加(分别为10.32%±3.08%比.3.33%±0.31%,13.80%±1.02%比.3.34%±0.76%,P<0.01),加入UII(10-9mol/L,10-8mol/L,10-7mol/L),用流式细胞术检测可观察到凋亡比率下降(5.86%±1.19%,5.96%±1.51%,5.46%±2.16%比.10.32±3.08%,P<0.01),选取UIl10-8mol/1剂量重复实验,以TUNEL染色法检测获得相似结果(6.76%±0.70%比13.80%±1.02%,P<0.01)。(4)TNF(30ng/m1)孵育引起总ERK1/2及磷酸化ERK1/2明显上调,总p38MAPK及磷酸化p38MAPK明显上调,经UII(10-8mol/L)预处理30分钟可增强ERK1/2上调,抑制p38MAPK上调。单纯应用UII(10-8mol/L)刺激内皮细胞可观察到ERK1/2上调,p38MAPK下调。结论(1)UII具有促进内皮细胞增殖的作用;(2)UII能够抑制TNF-α及撤血清生长因子诱导的内皮细胞凋亡;(3)UII能够引起内皮细胞ERK1/2表达上调,p38MAPK表达下调,并增强TNF-α诱导的ERK1/2表达上调,抑制其诱导的p38MAPK表达上调,可能是其促进增殖,抑制凋亡的分子基础。更多还原