缬草单萜氧化物对单个兔心室肌细胞钠通道的影响

【作者】 黄峥嵘； 唐其柱； 吴钢； 沈涤非； 王腾；

【机构】 武汉大学人民医院心内科；

【摘要】 目的采用全细胞膜片钳技术直接记录不同浓度缬草单萜氧化物(VMO)对钠通道的影响,以探讨其抗心律失常的细胞电生理机制。方法按文献报道的酶解法分离兔单个心室肌细胞。采用全细胞膜片钳记录钠电流(INa),膜电流的大小以电流密度表示,单位pA/pF。在电压钳制模式下,采用排管给药法,分别记录给药前的INa,以含30μg/LVMO、60μg/LVMO的细胞外液依次灌流5min,每次灌流后重复上述实验,观察用药前及不同浓度VMO灌流后INa,比较不同浓度甘松提取物对钠电流变化的程度。结果(1)VMO对INa的影响维持钳制电压为-140mV,指令电压从-70mV去极化至+30mV,跃阶10mV,钳制时间30ms,刺激频率0.5Hz,可记录到方向向下,快速激活快速失活的电流,可以被30μtmmol/L河豚毒阻滞,即为INa。对照组(用药前)、30μg/LVMO组、60μg/LVMO组INa峰值(INamax)分别为53.47±5.13pA/pF、40.25±4.18pA/pF、30.89±2.95pA/pF,30μg/LVMO组、60μg/LVMO组INamax与对照组相比分别降低23.4%和40.4%(n=8,P<0.05和P<0.01);(2)VMO对INa电流-电压关系曲线的影响以各个测试电压对应的电流为纵坐标,对应的电压为横坐标作出电流电压关系曲线,即INaI-V曲线。VMO使INaI-V曲线上移,浓度增加时上移更明显,但各浓度VMO均不改变INa的激活电位(-60mV)、峰值电位(-40mV)和反转电位(+30mV)(3)VMO对INa灭活后恢复曲线的影响采用双脉冲刺激法来记录INa灭活后恢复曲线。60μgm单萜氧化物使INa灭活后恢复曲线右移,说明用药后钠通道失活后再激活即复活时间延长。结论VMO对INa具有浓度和电压依赖性阻滞作用;VMO使INa的电流-电压曲线上移,浓度增加时上移更明显,但各浓度VMO均不改变INa的激活电位、峰值电位和反转电位;60μg/LVMO使INa灭活后恢复曲线右移,说明用药后钠通道失活后再激活即复活时间延长,提示其作用于钠通道的失活态。这可能是其抗心律失常作用的重要机制。由于明显延长钠通道失活后的恢复时间,VMO可能对由钙超载引起的心律失常有抑制效应。因此,VMO可能成为一个有希望的钠通道阻滞剂。近年来,对晚钠电流的研究日益受到重视,已发现在动物及人的心肌细胞也存在晚钠电流,进一步研究缬草单萜氧化物对晚钠电流的影响有重要意义。更多还原