长QT综合征的KvLQT1基因L191P突变的电生理特性研究

【作者】 杨进刚； 胡大一； 李翠兰； 刘文玲； 李蕾； 魏永祥； 刘小超；

【机构】 北京同仁医院心血管中心； 北京大学人民医院； 北京同仁医院心血管中心北京大学人民医院；

【摘要】 目的长QT综合征(10ngQTsyndrome,LQTS)是由于编码心脏离子通道的基因突变导致相应的离子通道功能异常而引起的一组综合征。最近我们通过单链构象多态性(Single Strand Confor-mation Polymorphism,SSCP)和PCR-DNA直接测序方法分别对国内30余个长QT综合征家系的先证者进行基因筛查,在对KvLQT1跨膜编码区S2-S6的检测时发现细胞质内的S2-S3区内的L191P突变。该研究拟采用分子克隆、转基因、细胞电生理等方法,与野生型KvLQT1(KvLQT1-WT)对照,对L191P基因突变(KvLQT1-L191P)进行表达和功能检测。方法以野生型(WT)KvLQT1的cDNA作为模板应用重组PCR诱变法制备突变,并经过测序验证。野生型和突变型cDNA克隆至pcDNA3.1质粒中,应用脂质体转染方法分别瞬时转染至人胚胎肾细胞(HEK293)中,绿色荧光蛋白质粒作为标记物共转染。转染后24～48小时后,选择孤立的荧光细胞,应用全细胞膜片钳技术记录表达电流。所有数据均采用Pulse软件采集,并应用Origin、SPSS和Prism软件进行数据处理。比较野生型和突变型基因表达电流的幅值和激活特征的差异。结果KvLQT1-WT的最大表达电流为(1248±250)pA,电流密度(59.4±11.9)pA/pF,KvLQT1-L191P的表达电流为(432±102)pA,电流密度(20.6±4.9)pMpF,二者相比具有显著差异(P<0.01)。KvLQT1-L191P的最大电流较KvLQT1-WT降低幅度达65.4%。与Kv-LQT1-WT相比,KvLQT1-L191P的最大尾电流也显著降低[(532±89)pA比(272±42)pA,P<0.01]。激活动力学曲线未发现KvLQT1-WT和KvLQT1-L191P突变型的半激活电压有明显差异[(34.4±10.6)mV比(47.9±18.2)mV,P>0.05];二者的斜率也无显著差异(27.7±9.6比39.2±10.8,P>0.05)。结论携带572T>C基因突变的患者KvLQT1亚基191位的氨基酸由亮氨酸变为脯氨酸后,突变体的电流激活特征与野生型KvLQT1相似,但电流幅值和电流幅值显著小于野生型KvLQT1。即L191P突变引起该基因编码的Iks电流显著降低是引起患者QT间期延长的机制。更多还原