ADP琼脂糖亲和层析法纯化HSP70多肽复合物

【作者】 杨杪； 王瑞波； 谭皓； 柯磊； 肖成峰； 邬堂春；

【机构】 华中科技大学同济医学院公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学系；

【摘要】 <正> 生物体在受热或其它理化因素(如高温、一氧化碳、烟碱、缺氧、重金属离子、紫外线照射等)的作用下,可以启动热休克蛋白基因,诱导性合成一组高度保守性的蛋白质-热休克蛋白(heat shock proteins,HSPs)。热休克蛋白根据分子量大小可分为HSP100,HSP90,HSP70,HSP60,小分子HSP(22～23kDa)及泛素(7～8kDa)等几个家族。HSP70是这一家族的主要成员。HSP70是进化上高度保守的蛋白质,除了具有重要的分子伴侣功能外,还参与细胞的抗损伤、分化等[6],更重要的是近些年来研究发现,HSP70能够将与其结合的抗原多肽通过内源性途径传递给MHCI分子,引发特异性的T细胞反应。HSP70多肽复合物的免疫原性来自与其结合的多肽,去除了多肽的HSP70则失去免疫原性,因而研究HSP70多肽复合物的功能必须先获得纯化的HSPO多肽复合物。本研究采用ADP琼脂糖亲和层析的方法,从小鼠肝脏或肿瘤组织中纯化HSP70多肽复合物。用Western blot和硝酸银染色对所纯化的蛋白质进行鉴定,表明纯化的蛋白质为均一的HSP70。为了证实纯化的HSP70是否为HSP70多肽复合物,将此纯化物与10mM ATP,3mM MgC12,0.5mM CaC12孵育后,用centricon 10滤过并收集小分子片段,经反向高压液相色谱分析,发现在215nm和220nm有很多吸收峰,证明此HSP70为HSP70多肽复合物。一般情况下,采用本方法1g组织可以获更多还原