中药诱导因子的研制及其对成骨潜能细胞成骨表达的干预作用

【作者】 李秀兰； 张杨； 师宜健； 王增立； 张文海； 冯俊奇； 华云旗；

【机构】 天津医院骨研所；

【摘要】 目的探讨生肌长骨中药对骨外结缔组织来源的成纤维细胞（Fbs）和骨髓来源的骨髓基质细胞（MSC_s）成骨表达的干预作用。为获取来源丰富且具高成骨表型表达的骨种子细胞提供安全、高效的成骨诱导因子。材料与方法选取以当归、象皮为君药的复方生肌长骨中药,采用正交设计, 经微波渗漉,水煎提取有效部位群,大孔树脂分离纯化,HPLC 对其进行多糖和阿魏酸含量标定。优选健康新西兰家兔从肉芽组织分离培养 Fbs,取胫骨骨髓分离培养 MSC_s。选用第3代细胞进行实验,对照组 MEM;实验组,中药诱导因子8mg/ml,标准对照 Fbs 为 FN40μg/ml,MSC_s 为地塞米松10^-8M;β-磷酸甘油10mM;V-C 0.05mg/ml。采用³H-TdR 标记检测细胞增殖活性;³H-脯氨基酸标记检测胶原合成;四环素荧光标记检测钙结节形成率;放免法检测骨钙素分泌活性,流式细胞分析观察中药诱导因子对成骨潜细胞的作用机制。结果1.制备和优化的中药诱导因子可有效地提高 Fbs 和 MSC_s³H-TdR 的标记活性,显示促进细胞增殖与对照组呈显著差异。2.中药诱导因子具有促进 Fbs 和 MSC_s 成骨表型表达的作用,包括细胞的成骨样细胞形态学表现,胞浆饱满,呈三角形, 核偏向一侧;胶原合成量增多;骨钙素分泌活性增高且分泌活性持久,四环素荧光标记率与对照呈显著差异。3.Fbs 和 MSC_s 比较,Fbs 增殖快速但易于老化,Fbs 和 MSC_s 均具成骨表型表达。4. 在中药诱导因子作用下,MSC_s 和 Fbs 数量快速增多与中药诱导因子促进细胞增殖和干预细胞凋亡密切相关。结论 Fbs 和 MSC_s 来源丰富,获取方便,在中药诱导因子的干预下显示稳定的成骨样细胞的表型表达和增殖活性,中药诱导因子安全、高效、廉价,可望研发成为一种新型的骨诱导因子。更多还原