丹参素对氧化低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞损伤的作用

【作者】 郑莲星； 李萍； 程晓曙； 王伶； 鲍慧慧；

【机构】 南昌大学第二附属医院心内科南昌大学心血管病研究所；

【摘要】 目的:研究丹参素对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)致血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响,探讨丹参素在动脉粥样硬化中所起的保护作用及可能机制。方法:取 Wister 大鼠胸主动脉,用反复贴块法培养主动脉平滑肌细胞,用光镜和免疫组化鉴定。铜离子氧化法制备氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)。1.取对数生长期的平滑肌细胞细胞以每孔2000个细胞接种于 96孔板中,分10组,每组六个孔。培养两天后换用无血清 DMEM,次日各组换用含5%FBSD- MEM 并在上述组中分别加入0、20、30、40、50、 60、70、80、90、100mg/l 的 ox-LDL,24小时后通过 MTT 法检测细胞增殖情况,以每组平均 OD 值绘制增殖曲线。2.取上述增殖最明显的 ox-LDL 浓度共培养主动脉平滑肌细胞,分别用不同浓度丹参素干预,24小时后通过 MTT 法检测细胞增殖情况。并提取不同组平滑肌细胞 mRNA,RT-PCR 反转录后 cDNA 经特异性引物再 PCR,以 GAPDH 作内标,测定 PDGF- BB 的表达水平。3.取 ox-LDL 开始诱导细胞凋亡的浓度共培养主动脉平滑肌细胞,分别用不同浓度丹参素干预,20小时后形态学观察并用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果: 1.MTT 实验表明低浓度 ox-LDL 干预下,各组平滑肌细胞 OD 值随其浓度增加而增加,在50 mg/l 时 OD 值最大,60 mg/l 时 OD 值开始下降,100 mg/l 时 OD 值最小并在镜下可见细胞凋亡。组间 OD 值有显著差异。2.以50 mg/ lox-LDL 加不同浓度丹参素干预,分别分组为①5%%FBS/DMEM;②5%FBS/DMEM+50mg/ lox-LDL;③5%FBS/DMEM+50mg/lox- LDL+50mg/L丹参素;④5%FBS/DMEM+ 50mg/lox-LDL+100 mg/L 丹参素,可见随丹参素浓度增加,细胞增殖明显下降,各组 PDGF -BB 的表达水平也有显著差异:第2组表达量明显增加,第3组较第2组显著下降,第4组最少。3.以100 mg/lox-LDL 加不同浓度丹参素干预,类似上述分组,20小时后形态学观察: ①组可见典型的平滑肌细胞生长特征,细胞多为梭形呈单层束状排列;②组可见细胞胞膜模糊,变圆,细胞空泡增多;③组可见细胞皱缩变小变圆并有脱落。④组可见细胞脱落,坏死,呈现片状细胞脱失区。流式细胞仪检测凋亡指数有显著性差异:①组几乎为零;②组凋亡指数明显增加;③组较②组增加;④组更甚。结论:①通过抑制血管平滑肌受损后 PDGF-BB mRNA 的表达,丹参素具有对抗 ox-LDL 在较低浓度时致平滑肌细胞增殖的作用;②丹参素呈浓度依赖性促进凋亡血管平滑肌细胞的进一步凋亡。上述作用显示丹参素通过抗平滑肌细胞增殖和促进凋亡细胞的清除在动脉粥样硬化发生发展中起保护作用。更多还原