川芎嗪对阴茎海绵体平滑肌细胞钙电流的影响

【作者】 肖恒军； 刘继红； 王涛； 樊龙昌； 陈俊； 刘波； 张炎； 刘小彭； 高新；

【机构】 中山大学附属第三医院泌尿外科； 华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科；

【摘要】 目的研究川芎嗪对阴茎海绵体平滑肌细胞钙电流的影响。方法两步酶解法急性分离兔阴茎海绵体平滑肌细胞,应用膜片钳技术记录川芎嗪对阴茎海绵体平滑肌细胞钙电流 (L-ICa)的影响。微电极拉制器双步拉制而成电极,拉制后的电极尖端直径为1-2um,入水后电极阻抗为2-5MΩ。参照Hamill法,建立标准的全细胞膜片钳记录方法,采用美国Axon 膜片钳放大器,通过设置实验参数,以适应钙电流记录的实验条件误差,实验在室温(20-22℃) 下进行。确认各系统已进入实验状态后,通过三维操纵仪移动电极,并轻压在细胞表面,稍加负压使电极尖端与细胞膜表面形成GΩ的高阻封接,当封接电阻为2-10GΩ,给电极内施加一负压吸破细胞膜,补偿快、慢电容电流和电极串联电阻,形成全细胞记录。对负压吸附细胞膜所产生的电容电流予以补偿,以减少钳位误差和记录电流信号失真,最终形成稳定电流线。将维持电位置于-60mV,步进电压为10mV,钳制时间为150ms,控制电位从-50 mV至 40mV,50ms去极化脉冲,可记录到一内向电流,即为L-ICao为了获得川芎嗪作用的半数有效浓度,我们采用半对数浓度给药法进行研究,药物对电流的抑制百分率通过公式(I对照- I药物)/I药物来计算,作出药物作用的量效曲线,量效曲线经Hill方程拟和,计算药物半数有效浓度EC50。在各脉冲下分别测得L-ICa,以其幅值相对于膜电位作图,得到L-ICa的I-V 曲线。结果不同浓度(10-6-3×10-4mol·L-1)川芎嗪浓度依赖性抑制L-ICa,EC50=11．24±3．76 umol·L-1,n=0．68±0．05。10-4mol·L-1川芎嗪使L-ICa的I-V曲线上移,在各测试电压下, L-ICa均呈不同程度的减少,但曲线形态基本不变,峰值电流仍在0mV附近(P<0．05 vs control)。结论川芎嗪浓度依赖性抑制阴茎海绵体平滑肌细胞钙通道的活性而起“钙拮抗”作用。更多还原