凝胶柱层析分离虎杖中白藜芦醇的条件探索

【作者】 张凌燕； 陈由强；

【机构】 福建中西医结合研究院； 福建师范大学生命科学学院；

【摘要】 目的:虎杖(Polygonum cuspidatum)的干燥根和茎,含有葸醌类和芪类化合物等有效活性物质,其中芪类成分中的白藜芦醇(resveratrol)是一种重要的植保素,能增强植株抵抗病原体的能力。现代研究表明,白藜芦醇具有抗癌、抗心血管疾病、抗突变、抗菌、抗炎、抗氧化、诱导细胞凋亡及雌激素调节等多方面有益人类健康的生物药理活性。本文对虎杖中白藜芦醇的分离纯化工艺进行探索。方法:精密称取虎杖粉末10．000g,加95％的乙醇水浴(60℃)回流提取三次,合并提取液,旋转蒸发浓缩后得到浸膏,在浸膏中加入15％硫酸溶液50m1后再加入氯仿50ml,震荡,回流提取1．5h后,放置室温,分离下层氯仿溶液,在上层15％硫酸溶液中依次加入乙酸乙酯50ml、40ml、40ml萃取3次,合并上层萃取液。萃取后的样品采用Sephadex LH-20凝胶层析柱分离,比较了不同溶剂、不同浓度、不同流速洗脱条件下白藜芦醇样品分离效果。将萃取液经浓缩的样品以及凝胶层析分离后得到的洗脱液通过SOURCE 5RPC反相层析测试。结果:1．经氯仿、乙酸乙酯二次萃取后的样品较醇提液中杂质的含量大大减少,而白藜芦醇的含量变化不大。2．当洗脱液为浓度60％的甲醇,流速为 0．5ml／min时,白藜芦醇样品在LH-20凝胶柱上的分离效果最好。此凝胶分离得到的洗脱液在SOURCE 5RPC预装柱上只有1个主峰,且与白藜芦醇标样的保留时间相同,可初步判断为白藜芦醇,并且其他成分含量已经很低。3．对色谱图进行积分处理:虎杖醇提液中白藜芦醇纯度(以白藜芦醇峰面积占总峰面积计算)为25．22％,萃取后达到41．31％,经凝胶过滤层析分离后的纯度可达80．34％,虎杖醇提液中白藜芦醇的峰面积为1057．0504,萃取后峰面积 1001．4155,柱层析分离后(浓度稀释了10倍)峰面积为91．7173,白藜芦醇峰面积没有发生大的变化,纯化步骤对白藜芦醇造成的损失很少,且纯度有了较大的提高。结论:本实验采用95％乙醇作为溶剂,能有效提取虎杖中的白藜芦醇,而且经济、安全。醇提后的样品采用氯仿,乙酸乙酯作为萃取剂具有较好的选择性,对虎杖中其他杂质的溶解性较小,有利于进一步的纯化,且对白藜芦醇几乎不造成损失。选用LH-20凝胶作为分离介质,利用其特有的分子筛作用和吸附层析作用,可以将白藜芦醇与虎杖中其他杂质有效分离开,且对白藜芦醇不会造成死吸附,在层析分离过程中样品损失很小,对虎杖中白藜芦醇具有良好的分离效果。更多还原